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辛酸提取法纯化多克隆抗体 已有1人参与
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该法可用于分离提取人、兔、小鼠血清中的Ig及杂交瘤诱生的腹水和培养上清液中McAb。 一、材料和试剂 1. 正辛酸。 2. 60mmol/L，pH4.0醋酸缓冲液，PBS。 3. 透析袋。 4. 高速低温离心机。 二、操作步骤 1. 将待提取样品用60mmol/L，pH4.0醋酸缓冲液稀释3～4倍，调pH至4.5，对含脂质较高的标本可采用二氧化硅粉或玻璃纤维吸附法除去脂质。 2. 在室温下边搅拌边缓慢加入正辛酸，按每ml样品中加25μl，若样品体积小于5ml，则每ml样品内加入30μl正辛酸，搅拌30min。 3. 10 000×g离心30min，取上清液通过定性滤纸过滤，装人透析袋，用20倍体积的PBS，4℃透析过液，中间换液3～4次。 4. 然后每毫升混合液加0.27g硫酸铵，搅拌30min。 5. 以5000g离心15min，收集沉淀物，溶于少量PBS中，再以15000×g离心20min。上清液即为提取的Ig，其中大部分为IgG，约占90％，少量为IgA及IgM，回收率>80％。整个操作可在24h内完成。 |
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2楼2017-02-20 13:06:17