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都说RNAi很容易降解，转染效率很低，是真的吗？
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RNAi就是利用降解双链RNA的酶系统，人工引入一段和目标RNA互补的序列，这样，在细胞内形成双链RNA，诱发降解机制，使目标RNA降解，无法被进一步翻译。 在转染过程中，有人就在担心，dsRNA的稳定性是相对于单链RNA而言的！RNA怎么办？ RNAi中，标准的非修饰的siRNA确实容易降解，这不仅在保存过程中，而且在转染过程中。对siRNA的降解，可以合成修饰的双链siRNA，以提高合成中的稳定性，使用合成好的siRNA。 不管是什么样的RNA实验，最基本的一点就是要严防RNase！尽量严格做到不要受RNA酶的污染。可以用高温变性、DEPC等处理使RNase失活就好了！ 所以还是勤快点的好！ 对转染来说，因为要接触血清，培养基以及细胞内酶的作用。这时，好的转染试剂作用就显现出来了。要做到在血清中游离时，保护siRNA不受培养基中酶和蛋白 的降解、吸附等影响，同时在进入细胞后不被溶酶体降解，并能释放到细胞质中。好的转染策略还不仅有保护的作用，更重要的是浓缩siRNA，不将细胞外的其 他成分，特别是毒性成分，如抗生素、过多的蛋白带入细胞，以避免细胞产生毒性反应，毒性对RNAi实验来说，影响非常大。 做RNAi干扰用siRNA还是shRNA进行转染需要根据您的试验综合考虑。 1.选择siRNA的优缺点 选择siRNA只能瞬时转染，作用周期短，但是siRNA相对与shRNA操作简便，试验周期短，转染效率一般优于shRNA，主要是优于siRNA分子特 性决定的，siRNA转染优化一般使用荧光标记的siRNA,在荧光倒置显微镜下观察荧光的强弱以及分布。荧光特异性比较弱。 2.选择shRNA的优缺点 选择shRNA可以瞬转也可以稳定转染，作用周期较长，需要构建载体，操作稍微复杂与siRNA,试验周期较长，转染效率与您的转染手段以及细胞类型有关。一般用GFP或者Luc检测转染效率。 不管是原代细胞还是别的类型细胞这两种方法都是可以选择，根据您的试验需要进行选择。不论siRNA还是shRNA做原代转染，需要优化转染条件，特别转染试剂选择以及转染手段上需要经验。如果转染效率还是比较低的话可以选择用流式细胞仪进行分选。 文章来源：英格恩技术的官方博客，原文详见：http://www.engreen.cn/2015/08/rnai-tansfection-123 都说RNAi很容易降解，转染效率很低，是真的吗？ |
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