应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 带有酶切位点的引物，TM值怎么设置啊？
141/2返回列表12下一页
查看: 4585  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

6491333

铁虫 (小有名气)

[交流] 带有酶切位点的引物，TM值怎么设置啊？

我的引物加了酶切位点是分别是68，66，65，66度。而原引物是50，52，54度左右！这扩片段是该怎么考虑设计反应TM值？？？

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
怪我咯|本人是用生命唱歌的歌手一名!
1楼 2016-08-22 11:24:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

781055707

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-08-22 22:43:36
xn8008: 应助指数+1 2016-08-23 08:03:04
以原引物是50，52，54度左右为准，引物的退火温度以结合模板DNA的碱基计算为准。
赞一下(1人) 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2016-08-22 11:27:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
6491333: 金币+2, 积极的童鞋！！赞 2016-08-22 20:11:33
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-08-23 08:03:19
引用回帖:
3楼: Originally posted by 6491333 at 2016-08-22 11:53:48
那循环过后，产物会带着酶切位点，是不是需要换成加了酶切位点引物的TM值呢？我好苦恼
...

不用纠结，就用原引物的Tm值，至于若干循环后是否需要提高退火温度，没有必要，能扩出来就行，放心做吧。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2016-08-22 15:09:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-23 08:03:31
引用回帖:
3楼: Originally posted by 6491333 at 2016-08-22 11:53:48
那循环过后，产物会带着酶切位点，是不是需要换成加了酶切位点引物的TM值呢？我好苦恼
...

它在从退火到延伸有个从55度到72的过程。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

6491333
采菊东篱下，悠然见南山。
6楼2016-08-22 16:17:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

6491333

铁虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 781055707 at 2016-08-22 16:17:24
它在从退火到延伸有个从55度到72的过程。...

对哈！哈哈，我扩出来了！！

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
怪我咯|本人是用生命唱歌的歌手一名!
7楼2016-08-22 20:10:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luckydog52

木虫 (著名写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 6491333 at 2016-08-25 13:13:54
做了梯度，扩的也亮
...

那就不要纠结那个tm最优, 抓紧时间做后续的试验。
时间紧迫不要浪费时间在这些小试验上

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
自信源于一次次成功的积累
13楼2016-08-25 13:38:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

6491333

铁虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-23 08:03:11
引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2016-08-22 11:27:54
以原引物是50，52，54度左右为准，引物的退火温度以结合模板DNA的碱基计算为准。

那循环过后，产物会带着酶切位点，是不是需要换成加了酶切位点引物的TM值呢？我好苦恼

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
怪我咯|本人是用生命唱歌的歌手一名!
3楼2016-08-22 11:53:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lisu555
5楼2016-08-22 15:22:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

waterzjf

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
前两个循环按不带酶切序列的tm计算，后面就算上带酶切序列的tm

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-08-24 13:13:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wer342342
9楼2016-08-24 16:50:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

6491333

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by waterzjf at 2016-08-24 13:13:27
前两个循环按不带酶切序列的tm计算，后面就算上带酶切序列的tm

也对

发自小木虫Android客户端
回复此楼
怪我咯|本人是用生命唱歌的歌手一名!
10楼2016-08-24 18:50:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 6491333 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭