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提取土壤DNA,用生工的柱式土壤基因组提取试剂盒，可以提出DNA,但是PCR扩增不出来。 已有1人参与
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提取土壤DNA,用生工的柱式土壤基因组提取试剂盒，可以提出DNA,但是PCR扩增不出来。现在先用PVP缓冲液预处理土壤，清洗了6遍直到缓冲液变清，再用试剂盒提取DNA,但是用提取液跑电泳没有条带，PCR也没有条带。 之前这样做只要模板DNA有带，'PCR就有条带，但目前为止只有一个有带。 不知道是什么原因，有什么解决办法吗？ 我觉得是清洗液的原因，导致DNA得率降低。 PVP缓冲液：TRis-HCL 50mM EDTA 20mM NaCL 100mM PVP 0.01g/ml PH 10 清洗步骤：300mg+3mlPVP缓冲液，漩涡振荡3min，在65℃水浴3min，再漩涡振荡3min，室温离心8000r，10min，弃上清，重复洗涤至上清液较为澄清。 发自小木虫Android客户端 |
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2楼2016-08-22 09:27:51
3楼2016-08-22 09:28:10
allenchem
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-25 06:39:30
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土壤中的PCR抑制剂成分主要是腐殖酸，判断依据就是最后的DNA溶液的颜色。如果是无色或者淡淡的色，那还好。如果是深黄色或者褐色，那很难p出来的 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-08-22 10:16:11
静默人声412
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-25 06:39:36
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加入高盐溶液后，颜色是深棕色，用TE缓冲液洗脱后，是淡黄色。模板稀释后还是P不出来。 用PVP缓冲液清洗土壤后，提DNA成功了一个，之后DNA提不出来，清洗后是不是把微生物洗掉了，所以提不出DNA.但是我看的文献上说这样预处理。 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-08-22 10:57:00
allenchem
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6楼2016-08-22 11:38:42
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8楼2016-08-25 07:13:01