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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 不对称pcr应该怎么做
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肖启友

金虫 (小有名气)

[求助] 不对称pcr应该怎么做 已有1人参与

各位大神，大家好！请问有哪位亲做过不对称pcr？我老师现在要我用普通的pcr仪做不对称Pcr，不知道如何开始，不知道有哪些步骤，不知道做不对称Pcr应该注意什么，有很多细节还不明白，我们实验室没人做过这个，所以在此向各位高手请教？急求，在此谢过各位高手啦！
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细节注定成败，习惯成就未来。
1楼 2016-08-20 09:54:26
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xhp_1638

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
肖启友: 金币+10, ★★★很有帮助 2016-08-20 15:34:26
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-21 08:00:19
无非是上下游引物用量不一样（可以先按1：10比例加），通过扩增后产生大量的单链产物（引物用量多的那条链）。程序跟常规的一样
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

肖启友
发展才是硬道理！
2楼2016-08-20 11:26:37
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普通回帖

肖启友

金虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-21 08:02:41
引用回帖:
2楼: Originally posted by xhp_1638 at 2016-08-20 11:26:37
无非是上下游引物用量不一样（可以先按1：10比例加），通过扩增后产生大量的单链产物（引物用量多的那条链）。程序跟常规的一样

谢谢您的回答！请问这样p出来怎么来区分单链和双链？用这样的pcr产物来跑电泳与普通的对称Pcr产物一样吗？或者有什么区别？谢谢您，我还是菜鸟，还望您多多指教，感激不尽！嘿嘿！
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细节注定成败，习惯成就未来。
3楼2016-08-20 15:33:08
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肖启友

金虫 (小有名气)
★
送红花一朵
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-21 08:02:47
引用回帖:
2楼: Originally posted by xhp_1638 at 2016-08-20 11:26:37
无非是上下游引物用量不一样（可以先按1：10比例加），通过扩增后产生大量的单链产物（引物用量多的那条链）。程序跟常规的一样

对了，老师，我还有一个问题想向您请教？在普通pcr中我加的上下游引物是各2uL(50uL体系中)，请问如果我做不对称pcr这个下游引物的量是如何来加？比如是1:10，是先母液配成1:10，然后加这个母液加4uL吗？对于这个我有很多疑惑，不好意思，打扰您，真心向您请教，麻烦您了！
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细节注定成败，习惯成就未来。
4楼2016-08-20 15:47:20
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ghs25372216

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
5楼2016-08-21 11:48:39
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肖启友

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ghs25372216 at 2016-08-21 11:48:39
你还是多看文献吧，只问解决不了问题

哦，好的！谢谢！
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细节注定成败，习惯成就未来。
6楼2016-08-22 08:33:55
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tangbowen

新虫 (小有名气)
我还以为是tail呢

发自小木虫IOS客户端
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7楼2016-08-23 23:49:00
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xhp_1638

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 肖启友 at 2016-08-20 15:33:08
谢谢您的回答！请问这样p出来怎么来区分单链和双链？用这样的pcr产物来跑电泳与普通的对称Pcr产物一样吗？或者有什么区别？谢谢您，我还是菜鸟，还望您多多指教，感激不尽！嘿嘿！...

产物大部分是单链的，现在大部分的染料是单双链都可以染。。。
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发展才是硬道理！
8楼2016-08-24 11:26:45
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xhp_1638

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 肖启友 at 2016-08-20 15:47:20
对了，老师，我还有一个问题想向您请教？在普通pcr中我加的上下游引物是各2uL(50uL体系中)，请问如果我做不对称pcr这个下游引物的量是如何来加？比如是1:10，是先母液配成1:10，然后加这个母液加4uL吗？对于这个我 ...

假设原来对称PCR引物用量分别是2ul、2ul，改成0.2ul、2ul（注：所用上下游引物浓度一致）
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发展才是硬道理！
9楼2016-08-24 11:31:54
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xhp_1638

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 肖启友 at 2016-08-20 15:47:20
对了，老师，我还有一个问题想向您请教？在普通pcr中我加的上下游引物是各2uL(50uL体系中)，请问如果我做不对称pcr这个下游引物的量是如何来加？比如是1:10，是先母液配成1:10，然后加这个母液加4uL吗？对于这个我 ...

再有疑问的话，建议你看看文献。这技术已经很成熟了
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发展才是硬道理！
10楼2016-08-24 11:34:09
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