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z妲妲

新虫 (小有名气)

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专业: 细胞生物学研究中的新方法

[交流] Hoechst染色已有3人参与

一、贴壁细胞
1. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。
2. 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5 ml固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
3. 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。
4. 加入0.5 ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。也宜用摇床，或手动晃动数次。
5. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
6. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。使细胞接触封片液，切勿弄反。
7. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
二、悬浮细胞
1. 离心收集细胞样品于1.5 ml离心管内，加入0.5 ml固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
2. 离心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。洗涤期间手动晃动。
3. 最后一次离心后吸去大部分液体保留约50 ml液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。
4. 稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。
5. 均匀滴上0. 5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。用吸水纸从边缘吸去液体，微晾干。
6. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
7. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。
8. H. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
三、组织切片
1. 常规包埋切片后，脱蜡，透明。
2. PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。可在六孔板中操作。
3. 加入0.5 ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。也宜用摇床，或手动晃动。
4. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。
5. 将切片置于载玻片上，滴一滴抗淬灭封片液，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。
6. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。

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