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蛋白透析后浓度减少！！求助 已有2人参与
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本人这阵子要纯化一个蛋白，带有his标签，进过镍柱纯化后，到最后透析阶段使用了透析带，透析液是PBS PH为7.4，换液两次，4度磁转过夜。洗脱液咪唑是250mM ph为8.0的，师姐要我洗掉咪唑，用透析带，但是第二天吸了一些透析后的蛋白去跑胶发现比透析前的蛋白的量小了很多（上样量一致）。期间我看到透析带里面有白色的微小浑浊物，不知道是不是蛋白沉淀，而且体积变化不大。第二次纯化蛋白的时候我把PBS的PH调到8.0，但是结果一样，浓度还是低了很多。网上查了很多资料没什么收获，现请求论坛大神们帮忙啊！！ 图的右1是maker，右3和右4是同一蛋白，分别是透析后和透析前，右2和右5是同一蛋白，分别是透析后和透析前。  @hc-material @gyesang 发自小木虫Android客户端 |
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3楼2016-08-17 23:58:34
hc-material
专家顾问 (职业作家)
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专家经验: +702 - BioEPI: 1
- 应助: 517 (博士)
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- 专业: 核技术及其应用
- 管辖: 生物科学
2楼2016-08-17 13:59:55
4楼2016-08-22 09:16:04
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小沉淀就是蛋白又复性沉淀了，而且透析代会稀释样品，浓度小正常，所以做的时候袋子要装的尽量小紧满，一定扎紧，免得样品漏出来，之后还应该将袋子放大分子粉末里尽量吸水浓缩蛋白。取的时候要做适当吹打，因为蛋白会贴袋，造成很大损失。 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2016-08-30 01:09:29
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