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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 透析问题
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风之翼HWX

新虫 (初入文坛)

[求助] 透析问题 已有3人参与

最近在做蛋白质的纯化实验，在透析过程中遇到一些困难，希望大家帮忙看看是什么情况：用的透析液是超纯水，第一次换液的时候，有明显的沉淀，但是在第二次换液后会发现蛋白质沉淀没有了，透析袋中的溶液变得澄清，这种蛋白质透析不完全的情况大致有哪些原因会引起？？
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1楼 2016-08-16 16:02:37
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chenyuanli

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的蛋白下来之后，在什么体系中？透析液直接用超纯水？没有缓冲能力的。说明白点大家才好给你分析
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嘻哈哈
2楼2016-08-16 17:02:05
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风之翼HWX

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenyuanli at 2016-08-16 17:02:05
你的蛋白下来之后，在什么体系中？透析液直接用超纯水？没有缓冲能力的。说明白点大家才好给你分析

蛋白质是用酸性PB缓冲液洗脱下来的，然后取样直接用超纯水进行透析，使蛋白质产生沉淀，再进行离心，中途会换液两次。但这几次的实验，在透析的时候第一次换液前能够看到明显的白色沉淀，到第二次换液后会发现沉淀没有了，用紫外检测上清液中蛋白质浓度，计算结果显示蛋白质没有完全透析出来
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3楼2016-08-17 09:16:39
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没看明白，是透析袋里面发生沉淀，还是透析液里面沉淀、透析要逐渐降低盐浓度，用水没缓冲能力，还有测下pH也有影响
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4楼2016-08-17 14:02:24
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风之翼HWX

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hc-material at 2016-08-17 14:02:24
没看明白，是透析袋里面发生沉淀，还是透析液里面沉淀、透析要逐渐降低盐浓度，用水没缓冲能力，还有测下pH也有影响

是透析袋里面产生沉淀，因为我们一直都是用超纯水透析的，但是最近几次老是出现透析不完全的现象
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5楼2016-08-19 16:03:51
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leland2

新虫 (正式写手)
我透析用pbs

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6楼2016-08-19 21:07:29
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leland2

新虫 (正式写手)
我都是先透析再纯化，再置换。

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7楼2016-08-19 21:08:38
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MR_zang

新虫 (初入文坛)
说实话，没看懂
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8楼2016-09-02 17:11:00
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虫四

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by leland2 at 2016-08-19 21:08:38
我都是先透析再纯化，再置换。

请问，您说的先透析再纯化，再置换，置换是用超滤管么？我现在想置换一种Buffer，两种buffer的NaCl浓度差距比较大，pH变换也比较大，透析全部沉淀，接下来想NaCL浓度进行梯度设置，pH也要梯度设置么
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9楼2016-10-10 16:33:34
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ljgangxmc

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

白色沉淀检测了么？是不是你的目的蛋白？
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10楼2016-10-14 13:49:46
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