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huangyeke

铜虫 (正式写手)

[交流] 高手帮忙说下这个SDS-PAGE胶的问题和改进方法

高手帮忙看看为什么底下跑的总是拖长了尾巴,本来底下应该是有条带的
可能是什么原因导致的
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boystrong

银虫 (正式写手)


sxdxrhyy(金币+1,VIP+0):谢谢参与讨论! 9-17 11:52
这种情况,我遇到过很多次。经多次调试,我个人认为原因主要由以下几种情况
1,胶没有配好。凝聚的过程速度太快。小师妹力求早点凝固上样,想出去玩,结果出现严重的拖尾似的现象。
2,尽量用单蒸水,大量的离子会使电流过大,胶内温度升高
3,跑胶的时候,一般是恒压。压缩胶的电压一般选择90V(约半个小时);到了分离胶后再110V一个小时。跑胶的时候要经常看着点,有时候机器不稳电流会跑大了。
4,还有可能的是你的样品里面有过多的小分子蛋白,或者你的蛋白开始降解了。处理样品煮的时间不要过长,100℃5分钟即可
梦想追风
9楼2009-09-16 09:21:44
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tjc2008tjc

金虫 (小有名气)


huangyeke(金币+1,VIP+0):thanks
我虽然没做过这试验,但我建议你换一下缓冲液或SDS-PAGE胶的孔径。或者是SDS及盐类等杂质未除尽
3楼2008-11-16 15:45:45
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zmcch

新虫 (初入文坛)


huangyeke(金币+1,VIP+0):thanks
应该是缓冲液的问题!最下面的一大块是loading buffer造成的,如果蛋白不会跑出去,建议把loading buffer跑出内槽
4楼2008-11-16 20:42:10
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544534326

至尊木虫 (著名写手)

我也出现过这种情况
人活着就要保持一种劳作的状态!
5楼2009-05-22 20:29:42
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