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有关铁还原菌的分离纯化问题
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各位吧友大家好，我现在正在做异化铁还原菌的分离纯化实验，方法参考的是李敬杰毕业论文《微生物异化还原Fe(Ⅲ)耦合氧化BTEX研究》中的分离纯化方法。内容如下： 用取自于长春市裴家垃圾填埋场的垃圾渗滤液浸泡黏土，装在容器中室温下厌氧密封保存。一个月后，称取上述土样品5g于50mL血清瓶中，加入1mLFe(OH)3悬液(含Fe量为616mg/mL)，最后用去离子水装满液封，在30℃下厌氧暗光培养1周。将培养后的土样悬液于1000r/min离心15 min，取上清液作为微生物接种液。 采用叠皿夹层厌氧培养法取1mL微生物接种液均匀涂布于琼脂浓度为10g/L的柠檬酸铁固体培养基，培养皿用封口膜封好，在厌氧培养箱中30℃条件下培养，同时做空白实验。培养1周后选取分散较好的平板，挑取单菌落转接于LB培养基中扩大培养2d。将扩大培养后的菌种管于3000 r/min离心l0min，用无菌水洗涤2-3次，弃去上清液，用2mL无菌水制得菌悬液。取1mL经LB培养基扩繁后的菌悬液于25mL血清瓶中，用柠檬酸铁液体培养基充满血清瓶，盖紧橡胶盖密封，在厌氧培养箱中30℃条件下培养，同时做空白实验。观察血清瓶中柠檬酸铁的变化，培养一段时间后，血清瓶内培养液应由黄色逐渐变为绿色，这是因为Fe(III)被还原为Fe(II)，表明菌落具有还原Fe(III)的功能。 将被还原的柠檬酸铁培养液作为接种液，于LB培养基中扩繁，离心、洗涤，得到的菌液接种于柠檬酸铁固体培养基上进行纯化。挑取单菌落扩繁后制得菌液，转接于柠檬酸铁液体培养基中，如此纯化3-4次，制得纯化的铁还原菌液，将含有铁还原菌液的血清瓶于4℃保存备用。 加粗的是纯化方法，我能看懂，但不知具体应如何操作。想问一下有没有做过的吧友，求赐教！ |
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