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zhaoyonggang银虫 (小有名气)
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如何从转染了pcDNA3.1质粒的HEK293T中抽提质粒
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| 我最近在做一个实验，从瞬转了pcDNA3.1质粒的HEK293T中回收质粒，应为pcDNA3.1带SV40 ori，应该是可以短期内在细胞内大量复制的，所以我预期应该回收效率不低。但是实际上，我在电转HEK293T两天后，用酚/氯仿法抽提质粒（用了Glycogen助沉淀），然后转化大肠杆菌（转化效率应该也没有问题，有阳性对照），换算下来1万个HEK293T细胞中纯化的质粒只能转化长出<200个大肠杆菌克隆。效率似乎太低了。有哪位做过类似实验吗，效率是否高？有经验可以传授一下吗？多谢！ |
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