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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 琼脂糖凝胶电泳拖尾了怎么办？
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ysk1989

新虫 (小有名气)

[交流] 琼脂糖凝胶电泳拖尾了怎么办？ 已有5人参与

跑过琼脂糖凝胶电泳的小伙伴，是不是经常遇到过电泳拖尾的现象啊？相信不少人点头如捣蒜了。提个质粒拖尾，提个DNA拖尾，连PCR也拖尾，拖尾什么的最常见了。验证也就算了，关键是图片拍出来不好看了，发文章什么的太影响档次了。下面我就跟据自己的经验跟大家讲讲琼脂糖凝胶电泳为什么会拖尾，有不足的希望大家多多评论补足啊（三人行必有我师嘛）！！

那琼脂糖凝胶电泳为什么会拖尾呢？

1. PCR产物出现拖尾的因素有很多，总结为一条，就是非特异性扩增过多。原因可能是：

（1） 模板不纯：纯化模板

（2） Buffer不合适：更换Buffer

（3） 退火温度偏低：适当提高退火温度

（4） 酶量过多：适量用酶，或调换另一种酶

（5） dNTP、Mg2+浓度偏高：适当降低dNTP和镁离子的浓度

（6） 循环次数过多：减少循环次数

（7） 模板量少或引物量过多：增加模板量，减少引物的用量

2. 提质粒的时候经常有这种个现象，有可能是样品浓度过高了。这种情况简单，稀释一下就行了。

3. 提基因组DNA的时候也常出现拖尾，最可能的就是提的DNA中掺杂有蛋白质，蛋白质会拽DNA的泳动。所以一定要注意提取基因的操作，减少蛋白质等杂质的出现。

4. 样品破碎或是被降解

5. 存在RNA：DNA前面的一片一般都是未清除的RNA，经过纯化，RNAse处理，就没有了

6. 电泳体系的问题：观察你的marker是否也存在拖尾现象，作为对照

（1）电泳缓冲液TAE或者TBE的污染：。建议更换缓冲液。

（2）上样时样品漂了，建议增加上样缓冲液的用量，以及小心加样。

（3）电压太高：适当降低电压

（4）根据核酸片断大小，适当把加大凝胶浓度。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。分离小于0.5kb 的DNA片段所需胶浓度是1.2-1.5%, 分离大于10kb的DNA分子所需胶浓度为0.3-0.7%, DNA片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%。
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1楼 2016-08-10 16:37:41
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mevis2016
2楼2016-12-08 10:06:57
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Amarde

铁虫 (初入文坛)
★
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LZ您好，我最近也在做PCR电泳，然后marker电泳时总是拖尾，分离开的话也只是分离出三四条带，而且最轻的还出现残缺的情况，请问下这个是我marker的浓度高了还是电泳缓冲体系的原因？TAE是自己配的
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3楼2016-12-30 15:10:43
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4楼2017-06-26 21:08:18
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零时以南

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
琼脂糖凝胶电泳拖尾了怎么办？

发自小木虫Android客户端
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5楼2017-11-08 20:39:37
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零时以南

新虫 (小有名气)
楼主我的是叶片基因组看看为什么这么容易降解

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6楼2017-11-08 20:40:24
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虚无缥缈的人

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 零时以南 at 2017-11-08 20:40:24
楼主我的是叶片基因组看看为什么这么容易降解

是不是拿TE溶的
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7楼2019-04-18 08:06:18
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