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琼脂糖凝胶电泳拖尾了怎么办？ 已有5人参与
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跑过琼脂糖凝胶电泳的小伙伴，是不是经常遇到过电泳拖尾的现象啊？相信不少人点头如捣蒜了。提个质粒拖尾，提个DNA拖尾，连PCR也拖尾，拖尾什么的最常见了。验证也就算了，关键是图片拍出来不好看了，发文章什么的太影响档次了。下面我就跟据自己的经验跟大家讲讲琼脂糖凝胶电泳为什么会拖尾，有不足的希望大家多多评论补足啊（三人行必有我师嘛）！！ 那琼脂糖凝胶电泳为什么会拖尾呢？ 1. PCR产物出现拖尾的因素有很多，总结为一条，就是非特异性扩增过多。原因可能是： （1） 模板不纯：纯化模板 （2） Buffer不合适：更换Buffer （3） 退火温度偏低：适当提高退火温度 （4） 酶量过多：适量用酶，或调换另一种酶 （5） dNTP、Mg2+浓度偏高：适当降低dNTP和镁离子的浓度 （6） 循环次数过多：减少循环次数 （7） 模板量少或引物量过多：增加模板量，减少引物的用量 2. 提质粒的时候经常有这种个现象，有可能是样品浓度过高了。这种情况简单，稀释一下就行了。 3. 提基因组DNA的时候也常出现拖尾，最可能的就是提的DNA中掺杂有蛋白质，蛋白质会拽DNA的泳动。所以一定要注意提取基因的操作，减少蛋白质等杂质的出现。 4. 样品破碎或是被降解 5. 存在RNA：DNA前面的一片一般都是未清除的RNA，经过纯化，RNAse处理，就没有了 6. 电泳体系的问题：观察你的marker是否也存在拖尾现象，作为对照 （1）电泳缓冲液TAE或者TBE的污染：。建议更换缓冲液。 （2）上样时样品漂了，建议增加上样缓冲液的用量，以及小心加样。 （3）电压太高：适当降低电压 （4）根据核酸片断大小，适当把加大凝胶浓度。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。分离小于0.5kb 的DNA片段所需胶浓度是1.2-1.5%, 分离大于10kb的DNA分子所需胶浓度为0.3-0.7%, DNA片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%。 |
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