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bluesky3858银虫 (小有名气)
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请教大家
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我在构建质粒的过程中出现了问题，我不知道为什么？希望大家给点建议！ 我的目的片段有100多bp,连接到质粒后转化长了，我挑了单克隆提质粒做pcr验证，P出了和目的基因大小一致的条带，但是用水和空质粒做模板，也同样P出了大小一样的质粒！引物分析理论上不会错配有产物！不应该有、产物的！并且pcr用的试剂肯定没有污染！引物也没有污染！ 后来又新合成的引物，又换了质粒做了连接，也出现了同样的问题！水和空质粒都能P出同样大小的带，并且所有的试剂和东西都是新的，肯定没有被污染！ 并且还用的两步pcr法，退火延伸70度，特异性要求很高的！ 这到底是怎么回事啊？ 请高人指点！ |
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