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DNA片段打靶，PCR验证既有目的条带也有野生型条带
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| 构建了RecET同源重组系统，用DNA片段打靶（含双侧同源臂及kan标签），kan抗性筛选平皿长了好多菌，用目的片段外围引物与kan标签内引物组合，扩增几乎100%阳性。且上下游的外围引物与kan标签组合均有阳性条带，说明DNA片段成功插入染色体，且位置正确。但如果用同源臂内部引物扩增却是双条带，既有目的片段，又有野生型条带。反复挑单克隆传代5次，结果依旧。目的基因为单拷贝，不明白为什么出现这个情况，难道细菌可以有异源双链稳定存在？不理解！。另外，所有鉴定都是用的菌落PCR，反复传代都到8代了，难道还会有DNA污染？不知道哪里出了问题。有没有遇到过这个情况的敬请赐教！ |
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2楼2016-08-25 21:57:05