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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » DNS测还原糖
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晃晃飞天

新虫 (正式写手)

[求助] DNS测还原糖 已有1人参与

本人今天做了DNS酶活测定，结果居然是对照组比实验组OD值高一倍，已哭晕在厕所！！！关键是我用的酶是买来的标品。。。对照组加反应液后加DNS直接煮沸2分钟，实验组中间加50摄氏度水浴15分钟再煮沸，为什么，求帮忙，已经两次这样了，这不科学～～～

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1楼 2016-08-04 21:51:41
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枚的回忆

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 晃晃飞天 at 2016-08-08 10:54:57
可是我的对照组是先放反应液沸水浴再加酶再加DNS再开始计时，感觉这样操作应该没有错吧？并且如果我添加高浓度的酶液，不论是实验组还是对照组比添加低浓度酶液的颜色都会加深，OD值都会升高，好奇怪啊？难道反应液 ...

“对照组是先放反应液沸水浴再加酶再加DNS再开始计时”。应该是酶液先用沸水钝化3-5min，再加底物，50度水浴15min后加DNS。推测你的酶是耐最温酶，先放反应液沸水浴再加酶时反应体系的温度不是100度，此时酶水解淀粉产生还原糖。建议你查查你购买的酶的酶学性质，看看最适反应温度，热稳定性等。。。。。。。
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7楼2016-08-08 16:54:49
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nash7758

银虫 (小有名气)
酶稀释倍数可能不对，或者酶解时间太短。

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2楼2016-08-07 11:23:02
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枚的回忆

铁虫 (小有名气)
对照组中应先把酶灭活，其他反应条件与实验组一致
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3楼2016-08-07 21:14:48
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晃晃飞天

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 枚的回忆 at 2016-08-07 21:14:48
对照组中应先把酶灭活，其他反应条件与实验组一致

可是我的对照组是先放反应液沸水浴再加酶再加DNS再开始计时，感觉这样操作应该没有错吧？并且如果我添加高浓度的酶液，不论是实验组还是对照组比添加低浓度酶液的颜色都会加深，OD值都会升高，好奇怪啊？难道反应液中的菊粉直接高温水解了？这也没有道理啊？
DNS测还原糖



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4楼2016-08-08 10:54:57
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晃晃飞天

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 枚的回忆 at 2016-08-07 21:14:48
对照组中应先把酶灭活，其他反应条件与实验组一致

我是这样做的

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5楼2016-08-08 10:55:45
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晃晃飞天

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by nash7758 at 2016-08-07 11:23:02
酶稀释倍数可能不对，或者酶解时间太短。

反应时间半个小时，也够了吧

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6楼2016-08-08 10:56:45
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晃晃飞天

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 枚的回忆 at 2016-08-08 16:54:49
“对照组是先放反应液沸水浴再加酶再加DNS再开始计时”。应该是酶液先用沸水钝化3-5min，再加底物，50度水浴15min后加DNS。推测你的酶是耐最温酶，先放反应液沸水浴再加酶时反应体系的温度不是100度，此时酶水解淀 ...

恩，谢谢啦，感觉这酶最适温度应该挺高的

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8楼2016-08-08 20:58:29
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bzzwx70
祝福
9楼2016-08-08 22:12:47
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bzzwx70
祝福
10楼2016-08-08 22:51:23
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