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胡笳桃子

新虫 (小有名气)

[交流] 如何浓缩质粒DNA

昨晚大概培养了十个小时就抽提质粒了,RNA消化时间也只有45min(一般都用60min,为了赶时间睡觉……)

然后提了10管,上样2ul电泳,感觉大概在30ng/ul左右,浓度蛮低的。

请问该怎么浓缩又不影响质粒纯度?

[ Last edited by 胡笳桃子 on 2008-11-14 at 11:25 ]
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赠人玫瑰,手有余香。
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翱天

新虫 (初入文坛)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与活动~鼓励新虫~~
氯化铯密度梯度离心纯化吧
路过。。。
2楼2008-11-14 11:56:32
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VeroE6

金虫 (正式写手)

007小丑鱼

冷冻干燥,成冻干粉以后随便稀释,多大浓度都可以
3楼2008-11-14 12:31:14
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renyjzx2008

金虫 (小有名气)


司马诸葛(金币+1,VIP+0): 8-11 19:13
NaAc(醋酸钠)沉淀啊
4楼2008-11-14 13:14:15
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胡笳桃子

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by renyjzx2008 at 2008-11-14 13:14:
NaAc(醋酸钠)沉淀啊

具体是怎样的?
赠人玫瑰,手有余香。
5楼2008-11-14 14:09:52
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mascotte

金虫 (正式写手)

★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论~
分子克隆有详细的描述,具体步骤如下:
1、估算含有质粒溶液的体积V,加入V/9体积的3M NaAc,(我喜欢在质粒溶液中再加入一定量的水,使得总体积大概在270ul 左右,之后加30ul NaAc)使NaAc终浓度为0.3M。
2、加入2倍体积冰冷无水乙醇,冰上孵育或-20度 20min,
3、最大速度离心10min,
4、用75%乙醇洗涤2次(每次700ul即可),
5、室温晾干,
6、加入适当体积的水或TE buffer溶解即可。
6楼2008-11-14 15:11:02
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