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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何浓缩质粒DNA
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胡笳桃子

新虫 (小有名气)

[交流] 如何浓缩质粒DNA

昨晚大概培养了十个小时就抽提质粒了，RNA消化时间也只有45min（一般都用60min，为了赶时间睡觉……）

然后提了10管，上样2ul电泳，感觉大概在30ng/ul左右，浓度蛮低的。

请问该怎么浓缩又不影响质粒纯度？

[ Last edited by 胡笳桃子 on 2008-11-14 at 11:25 ]
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赠人玫瑰，手有余香。
1楼 2008-11-14 11:23:59
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翱天

新虫 (初入文坛)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与活动~鼓励新虫~~
氯化铯密度梯度离心纯化吧
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路过。。。
2楼2008-11-14 11:56:32
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VeroE6

金虫 (正式写手)

007小丑鱼
冷冻干燥，成冻干粉以后随便稀释，多大浓度都可以
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3楼2008-11-14 12:31:14
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renyjzx2008

金虫 (小有名气)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0): 8-11 19:13
NaAc(醋酸钠)沉淀啊
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4楼2008-11-14 13:14:15
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胡笳桃子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by renyjzx2008 at 2008-11-14 13:14:
NaAc(醋酸钠)沉淀啊

具体是怎样的？
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赠人玫瑰，手有余香。
5楼2008-11-14 14:09:52
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mascotte

金虫 (正式写手)
★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论~
分子克隆有详细的描述，具体步骤如下：
1、估算含有质粒溶液的体积V，加入V/9体积的3M NaAc，（我喜欢在质粒溶液中再加入一定量的水，使得总体积大概在270ul 左右，之后加30ul NaAc）使NaAc终浓度为0.3M。
2、加入2倍体积冰冷无水乙醇，冰上孵育或-20度 20min，
3、最大速度离心10min，
4、用75%乙醇洗涤2次（每次700ul即可），
5、室温晾干，
6、加入适当体积的水或TE buffer溶解即可。
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6楼2008-11-14 15:11:02
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