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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 关于Cas9-sgRNA构建的困惑，质粒一直提不出来，向大家求助！！
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hubuzdw

金虫 (正式写手)
“cas9在component cell里发生切割”，感觉更像是Cas9 切割了质粒，大肠杆菌里面，启动子没有那么严格，可能有渗漏。如果能体外证明你另外4个sgRNA能切割靶序列，这两个就不用纠结了。
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清风吟月,秋水伊人
11楼2016-08-14 11:58:42
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现在很好

新虫 (初入文坛)
我也在做Cas9，我想请问一下你在设计sgRNA的时候用的是哪些软件？还有就是sgRNA的模板是正义链还是反义链？
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12楼2016-10-10 17:17:03
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乌托小邦

木虫 (正式写手)

小虫虫
引用回帖:
12楼: Originally posted by 现在很好 at 2016-10-10 17:17:03
我也在做Cas9，我想请问一下你在设计sgRNA的时候用的是哪些软件？还有就是sgRNA的模板是正义链还是反义链？

就是mit的那个网站。。模板正反义链都可以的，因为最终会两条链都切断。
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凡事心中有数，人生难得糊涂。
13楼2016-10-10 20:35:18
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乌托小邦

木虫 (正式写手)

小虫虫
引用回帖:
11楼: Originally posted by hubuzdw at 2016-08-14 11:58:42
“cas9在component cell里发生切割”，感觉更像是Cas9 切割了质粒，大肠杆菌里面，启动子没有那么严格，可能有渗漏。如果能体外证明你另外4个sgRNA能切割靶序列，这两个就不用纠结了。

恩 已经放弃那两个了。。
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凡事心中有数，人生难得糊涂。
14楼2016-10-10 20:35:45
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darlingbear

新虫 (小有名气)
那你做转化时有没有做阳性和阴性对照，可能是长的单菌落有问题呢

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15楼2016-10-11 19:17:36
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卷哥

金虫 (小有名气)
也在做这个 同小白

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16楼2016-10-14 19:22:20
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