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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 点杂交筛选，用DIG标记，CSPD显信号，出问题了
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kingkocxr

金虫 (正式写手)

[交流] 点杂交筛选，用DIG标记，CSPD显信号，出问题了

我做点杂交筛选文库克隆，用DIG标记植物和病原物基因组(已经酶切过)做探
针，PCR产物点膜，CSPD显信号，一切按照protocol做，可是最后没有信号。有这么做过的或类似工作的大侠吗？能否指点下啊?我是80度烤膜固定2.5小时,期间一些过程时间稍微长了些,因为准备试剂和溶液啊等等.最后x-ray片(chemiluminescent film)按照常规develop,fix,发现有背景而无信号.郁闷.我设了一个阳性对照，但是在2小时后（试剂盒是建议15到20分钟的！此时看不到阳性
对照的）还是比较弱，其他的则很差劲了，而且背景上来了。我的杂交温度42度杂交。刚才看了网上资料，一般都是说65-68度杂交。

我用的是Roche的DIG high prime and detection Kit II.今天取64度杂交，还是没有信号，但是背景降低了一些
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1楼 2008-11-14 02:35:02
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kingkocxr7817

nobody knows why?
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2楼2008-11-14 22:36:48
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luckyyan

新虫 (小有名气)
不太清楚。我也想了解一下。
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3楼2008-11-16 21:51:21
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agtc

至尊木虫 (著名写手)
PCR产物和probe是怎么处理的？
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慢慢的走是为了走的更远!
4楼2008-11-16 21:59:43
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kingkocxr7817

I do not treat PCR products, but digested genome and purified them before labeling.
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5楼2008-11-21 21:03:11
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