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fykfmj

新虫 (小有名气)

[求助] ARE luciferase reporter assay,Luciferase值和内参值同时下降。 已有1人参与

实验设计,使用 lip2000同时转染了ARE-luciferase reporter和 β-galactosidase plasmid,24h后,酶解,种细胞,再培养24h后
不同的药物浓度 处理,然后在12h时,裂解测量luciferase ,发现luciferase 值下降, β-galactosidase也下降。
这是正常的吗?在药物处理后,细胞会有死亡。我是直接用luciferase 值/ β-galactosidase值,归一化后还是下降的,与其他数据相悖。
另外想问下,如何分析数据?其中pARE-luc(报告基因质粒)是在碧云天买的,
β-galactosidase plasmid是实验室保存的。希望大家帮忙看看有什么漏洞和建议,不胜感激。
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fykfmj

新虫 (小有名气)

真心没有金币,希望大家帮帮忙
2楼2016-08-01 10:26:02
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ysk1989

新虫 (小有名气)


建议您换一下转染试剂,lipo2000的细胞毒性还是挺大的,英格恩的转染试剂不错,纳米聚合物材料,远远优于脂质体转染。
3楼2016-08-01 15:37:00
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fykfmj

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ysk1989 at 2016-08-01 15:37:00
建议您换一下转染试剂,lipo2000的细胞毒性还是挺大的,英格恩的转染试剂不错,纳米聚合物材料,远远优于脂质体转染。

和转染试剂关系不大。我用的A549细胞最lipo2000不太敏感。只是处理后,细胞死亡了。

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4楼2016-08-01 19:17:41
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特洛克

新虫 (初入文坛)


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
fykfmj: 金币+10, 有帮助 2016-08-01 22:41:10
可能是因为药物处理对luciferase 和 β-galactosidase都有影响
5楼2016-08-01 22:32:04
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fykfmj

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 特洛克 at 2016-08-01 22:32:04
可能是因为药物处理对luciferase 和 β-galactosidase都有影响

你好,有没有其他的可以做内参的。我看到有人用蛋白浓度归一化,这个方法可行吗。谢谢

发自小木虫Android客户端
6楼2016-08-01 22:40:31
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