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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » ARE luciferase reporter assay，Luciferase值和内参值同时下降。
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fykfmj

新虫 (小有名气)

[求助] ARE luciferase reporter assay，Luciferase值和内参值同时下降。 已有1人参与

实验设计，使用 lip2000同时转染了ARE-luciferase reporter和 β-galactosidase plasmid，24h后，酶解，种细胞，再培养24h后
不同的药物浓度 处理，然后在12h时，裂解测量luciferase ，发现luciferase 值下降， β-galactosidase也下降。
这是正常的吗？在药物处理后，细胞会有死亡。我是直接用luciferase 值/ β-galactosidase值，归一化后还是下降的，与其他数据相悖。
另外想问下，如何分析数据？其中pARE-luc(报告基因质粒)是在碧云天买的，
β-galactosidase plasmid是实验室保存的。希望大家帮忙看看有什么漏洞和建议，不胜感激。
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1楼 2016-08-01 10:25:06
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fykfmj

新虫 (小有名气)
真心没有金币，希望大家帮帮忙
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2楼2016-08-01 10:26:02
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ysk1989

新虫 (小有名气)
建议您换一下转染试剂，lipo2000的细胞毒性还是挺大的，英格恩的转染试剂不错，纳米聚合物材料，远远优于脂质体转染。
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3楼2016-08-01 15:37:00
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fykfmj

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ysk1989 at 2016-08-01 15:37:00
建议您换一下转染试剂，lipo2000的细胞毒性还是挺大的，英格恩的转染试剂不错，纳米聚合物材料，远远优于脂质体转染。

和转染试剂关系不大。我用的A549细胞最lipo2000不太敏感。只是处理后，细胞死亡了。

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4楼2016-08-01 19:17:41
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特洛克

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fykfmj: 金币+10, ★有帮助 2016-08-01 22:41:10
可能是因为药物处理对luciferase 和 β-galactosidase都有影响
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5楼2016-08-01 22:32:04
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fykfmj

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 特洛克 at 2016-08-01 22:32:04
可能是因为药物处理对luciferase 和 β-galactosidase都有影响

你好，有没有其他的可以做内参的。我看到有人用蛋白浓度归一化，这个方法可行吗。谢谢

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6楼2016-08-01 22:40:31
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