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fz2008

银虫 (正式写手)

[求助] 小片断DNA的PCR条件怎么设定啊?【有效期至11月14日】

我的目的基因片段长为181个碱基。引物长为27个碱基。Tm是60.49摄氏度。请问我应该怎样设计pcr条件扩增我的目的片段啊?谢谢!

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人生一场戏
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小鱼8510

铁虫 (初入文坛)

PCR条件

94  3min
94  45s
55  30s
72  30s
72  5min
2楼2008-11-13 21:32:16
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lurong8980

新虫 (初入文坛)

PCR的条件

90摄氏度,是目的基因变性,30-120s;50-60度复性,单链DNA与引物结合,30-60s;
72摄氏度,再Taq聚合酶的作用下延伸链,60-120s。
3楼2008-11-14 09:14:37
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liufuchun721521

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

4楼2008-11-14 20:47:56
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xuancj

木虫 (正式写手)

annealing temp. 一般60度,按情况增减,原则上是要比tm低,但不一定
5楼2008-11-15 08:39:20
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lifei-fei

金虫 (著名写手)

伊丽莎白

我的是211bp,也比较短,
94  3min
94  40s
56  30s
72  30s
30个循环
72  5min  

应该能扩增出条带的!
做有意义的事就是好好活着!
6楼2008-11-15 10:55:47
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