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小木虫论坛-学术科研互动平台» 网络生活区» 有奖问答 » 有奖问答中转子版 » 小片断DNA的PCR条件怎么设定啊？【有效期至11月14日】
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【悬赏金币】回答本帖问题，作者fz2008将赠送您 5 个金币

fz2008

银虫 (正式写手)

[求助] 小片断DNA的PCR条件怎么设定啊？【有效期至11月14日】

我的目的基因片段长为181个碱基。引物长为27个碱基。Tm是60.49摄氏度。请问我应该怎样设计pcr条件扩增我的目的片段啊？谢谢！
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人生一场戏
1楼 2008-11-13 13:42:06
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小鱼8510

铁虫 (初入文坛)

PCR条件

94  3min
94  45s
55  30s
72  30s
72  5min
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2楼2008-11-13 21:32:16
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lurong8980

新虫 (初入文坛)

PCR的条件

90摄氏度，是目的基因变性，30-120s;50-60度复性，单链DNA与引物结合，30-60s;
72摄氏度，再Taq聚合酶的作用下延伸链，60-120s。
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3楼2008-11-14 09:14:37
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liufuchun721521

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
4楼2008-11-14 20:47:56
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xuancj

木虫 (正式写手)
annealing temp. 一般60度，按情况增减，原则上是要比tm低，但不一定
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5楼2008-11-15 08:39:20
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lifei-fei

金虫 (著名写手)

伊丽莎白
我的是211bp，也比较短，
94  3min
94  40s
56  30s
72  30s
30个循环
72  5min  

应该能扩增出条带的！
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做有意义的事就是好好活着！
6楼2008-11-15 10:55:47
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