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植物原生质体的制备 已有1人参与
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原生质体是指植物细胞去掉细胞壁的裸露部分。它在培养条件下，①具有再生细胞壁，进行连续的细胞分裂并再生成完整植株的能力；②具有摄取外源大分子、细胞器，以及细菌，病毒的能力，因此是进行遗传操作，基因转移的好材料；③通过同种和异种植物的原生质体融合，可产生异核体，实现体细胞杂交，培育出新品种。 实验原理 去掉植物细胞壁的方法可以是机械的人工操作，也可以利用酶解法。较早利用机械法制备原生质体的首推Klercker（1892），直到1960 年英国科学家Cocking 才第一次用酶法大量制备原生质体。本实验以植物的叶肉组织为材料，利用纤维素酶和果胶酶来消化细胞壁，分离细胞。 实验用品 器具：显微镜、离心机、离心管、剪刀（2）、镊子（2）、吸管、小培养皿、载片、盖片。 试剂：0.16mol/L CaCI.2.H2O、20%蔗糖液、酶解液 材料：油菜或菠菜或烟草 实验方法步骤 1、取材 根据实验目的和条件选取不同的材料 2、分离原生质体 ① 撕叶下表皮 ② 酶解 将撕去下表皮的叶片剪成小块，放在盛有5mL 酶液的小培养皿中，让去除下表皮的一面接触酶液，辅满一层，在25~28℃下酶解60~90 分钟 3、收集纯化 （1）用吸管将酶解液吸至5mL 离心管中，以600rpm 离心5 分钟以上，使原生质体沉降 （2）将上清（酶解液）回收，剩下原生质体及残渣于管底 （3）加氯化钙液约2mL，轻轻吹打均匀 （4）用注射器向离心管底部缓缓注入蔗糖约2—3mL，出现下部蔗糖液，上部原生质体悬浮液 （5）以600rpm 离心10 分钟，在两液相之间出现一条绿色带，便是纯净的原生质体 4、观察或培养 取少许原生质体于载片上，盖片观察其形态，或者将原生质体接种在培养基上进行培养，再生植株 |
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