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cheng201618

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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专业: 免疫学研究新技术与新方法

[求助] 各位前辈我想问下用trizol提取血清中的RNA，血清和t... 已有4人参与

各位前辈我想问下用trizol提取血清中的RNA，血清和trizol的用量为多少呢？ @youlinglyw

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1楼 2016-07-26 21:41:59

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

你是路人甲

铜虫 (小有名气)

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专业: 微生物遗传育种学

【答案】应助回帖

楼主血清是新鲜的还是冻存的？如果是冷冻的需要完全解冻之后再加Trizol，通常Trizol和血清的比例是1:1，也可以稍多加一些Trizol，少加些血。混匀之后放置10分钟左右，直接加三氯甲烷混匀再去离心，可以不用先离心去沉淀之后再加三氯甲烷。我们实验室用BIOG CFRNA EASY KIT离心技术提取RNA比Trizol要简便些,楼主需要注意如果用Trizol每个步骤操作要快，用的时间药短些，防止RNA降解,异丙醇沉淀的时候，放-20°C的冰箱半个小时，或再适当延长一点时间。迅速离心，之后加75%乙醇。只洗一遍，洗2遍易损失部分RNA。不要过分干燥，管内稍有点残余的乙醇也没关系。干燥一会就迅速加DEPC水少量。提取RNA之后迅速反转录成cDNA再保存