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guaidiandian

新虫 (小有名气)

[求助] 用1302GFP载体转秦烟在卡那上筛选出抗性苗怎么解释呢

具体实验过程是将目的基因连在1302GFP定位载体上 然后用农杆菌LBA4404用叶缘盘法转化秦烟植株外植体 后用卡那霉素筛选出了转基因植株 但后来查阅资料发现抗卡那霉素的基因不在左边界和右边界之内 也就意味着卡那霉素抗性基因根本不可能转入植物基因组中 用卡那霉素筛选的方法是错误的 但是的确用卡那霉素筛到了一批转基因面子并筛选了两遍 都有出现黄化的外植体 最后将新长出的芽通过pcr鉴定也出现有条带和没有条带的 位置也对 说明整个操作过程和思路也正确 就是用卡那霉素筛选有问题 不知道该怎样解释 望各位大神赐教!不胜感激!
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

它对Kan不敏感或者不那么敏感,仅仅PCR鉴定是不够的,假阳性概率高

发自小木虫Android客户端
2楼2016-07-25 21:09:23
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guaidiandian

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2016-07-25 21:09:23
它对Kan不敏感或者不那么敏感,仅仅PCR鉴定是不够的,假阳性概率高

但是一是通过分析得出插入植物基因组的前段的确不应该包含了卡那霉素的抗性基因 而且在加卡那霉素的培养集中也出现了大量的黄化的 证明抗生素起到了筛选作用  pcr的时候还用了两对引物出来的结果也是一致的
3楼2016-07-25 22:43:10
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by guaidiandian at 2016-07-25 22:43:10
但是一是通过分析得出插入植物基因组的前段的确不应该包含了卡那霉素的抗性基因 而且在加卡那霉素的培养集中也出现了大量的黄化的 证明抗生素起到了筛选作用  pcr的时候还用了两对引物出来的结果也是一致的...

你为什么不用潮霉素筛?这种问题本来就不应该产生啊

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4楼2016-07-26 08:21:14
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