| 查看: 6135 | 回复: 7 | ||
[求助]
wb显影后总是出现黑色边框，且背景很黑，急啊。求解，感谢 已有2人参与
|
|
新手，最近在做WB。出现了以下问题： 1、做了4-5次，总是出现黑色边框，如下图 2、背景出现黑色部分，感觉脏的样子。 3、做actin，有的样品出现条带，有的没有。 实验条件： 转膜条件：300mA， 50min or 1h 封闭1.5h, 用的5%脱脂奶粉+TBST 一抗，CST β-Actin, 1:5000，室温摇1h, 4°过夜 次日，室温摇0.5h，TBST洗3次，10min/次， 孵二抗，santa 1:5000 or 1:10,000，室温摇1h。 TBST，3*10min，TBS ，3*10min 暗室显影。 问了一些同学，，试过调整抗体浓度，稀释更高的倍数。始终不得其解。 有经验的大侠帮帮忙，解惑，不胜感激啊！！  wb.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生
已经有5人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有4人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有3人回复
2楼2016-07-23 16:15:34
柳梢月
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 3508.9
- 散金: 60
- 红花: 2
- 帖子: 99
- 在线: 214.2小时
- 虫号: 2126620
- 注册: 2012-11-14
- 专业: 有机合成
3楼2016-07-24 21:04:11
柳梢月
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 3508.9
- 散金: 60
- 红花: 2
- 帖子: 99
- 在线: 214.2小时
- 虫号: 2126620
- 注册: 2012-11-14
- 专业: 有机合成
|
一抗4°过夜后第二天干嘛还要室温要0.5小时呢，没必要。其次，稀释一抗和二抗的时候都可以在抗体里加封闭液，用TBST洗的时间可以延长到10min5次 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-07-24 21:15:33
5楼2016-09-05 08:40:36
wuhu0612331
铜虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 3526.1
- 散金: 221
- 红花: 16
- 帖子: 999
- 在线: 159.1小时
- 虫号: 3232337
- 注册: 2014-05-25
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
6楼2016-09-05 09:40:33
wuhu0612331
铜虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 3526.1
- 散金: 221
- 红花: 16
- 帖子: 999
- 在线: 159.1小时
- 虫号: 3232337
- 注册: 2014-05-25
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
7楼2016-09-05 09:41:27
wuhu0612331
铜虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 3526.1
- 散金: 221
- 红花: 16
- 帖子: 999
- 在线: 159.1小时
- 虫号: 3232337
- 注册: 2014-05-25
- 性别: GG
- 专业: 免疫生物学
8楼2016-09-05 09:42:40
10