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不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
LY1199: 金币+3 2016-07-29 10:42:24
引物二聚体这么亮。说明引物特异性不好。适当提高退火温度。
或者可以加大模版量，增加几个循环，这样目的片段的量会得到更多一些，方便后续实验
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11楼2016-07-25 18:28:01
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阿尔卑斯英

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

Marker度量不准确，更换maker吧，引物添加量过多，引物最适加入量0.1uM-0.5uM。
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12楼2016-07-26 16:06:08
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LY1199

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 阿尔卑斯英 at 2016-07-26 16:06:08
Marker度量不准确，更换maker吧，引物添加量过多，引物最适加入量0.1uM-0.5uM。

好的  我再试试 多谢了
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13楼2016-07-27 10:31:44
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LY1199

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 不爱做实验 at 2016-07-25 18:28:01
引物二聚体这么亮。说明引物特异性不好。适当提高退火温度。
或者可以加大模版量，增加几个循环，这样目的片段的量会得到更多一些，方便后续实验

嗯  引物因为是在文献找的  没有自己搞
应该会有些问题  但是现在已经更换不了……55555
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14楼2016-07-27 10:32:52
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不爱做实验

银虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by LY1199 at 2016-07-27 10:32:52
嗯  引物因为是在文献找的  没有自己搞
应该会有些问题  但是现在已经更换不了……55555...

更换不了？你可以看看目前引物是不是自身发卡结构太明显。
如果是，可以尝试把引物去掉几个碱基，再查看发卡结构。
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15楼2016-07-28 14:29:52
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wbhnan

新虫 (初入文坛)
marker 换一个，胶的浓度是多少，还有胶有点不均匀。
退火温度调整一下，做个梯度实验摸索一下，因为你的事短片段所以延伸时间缩短一下，主要看你的2*Taq Mix的说明，再不行把6ul DD Water换成2ul DD Water+4ul  5*甜菜碱试试
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16楼2016-08-12 17:31:30
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