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bstone88木虫 (小有名气)
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[求助]
球状丝状真菌ROS检测（DCFH-DA荧光探针法），平行样之间数值差距巨大 …………
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我现在的操作方法： 20ml平行样2个，分别加入dcfh-da-dmso 5μL，涡旋混合器3min打散菌丝 → 24℃摇床30min → 5000 rmp ,10 min离心，pbs洗2次 → 再次涡旋混合器3min，6个平行样测荧光。 本想可能是由于菌丝没有充分分散均匀，所以由手摇振荡换成了涡旋混合器，但是结果依然是平行样差距巨大（400~1000均有分布）。 或者是不是因为荧光探针浓度过高（67uM）？导致两次洗不干净？？ 谢谢大神指点迷津！！！  |
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