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legend0463

金虫 (小有名气)

[交流] 退火温度的确定

我的两个引物,一个Tm值是68度,另一个是61度。PCR扩增退火温度多少合适啊??
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yelitao1983

银虫 (小有名气)


司马诸葛(金币+1,VIP+0): 8-11 19:14
PCR退火温度一般比TM低5度,56度你试试
2楼2008-11-11 18:37:13
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synhily

木虫 (正式写手)

按照我的经验:
1.在http://sky.scnu.edu.cn/life/teac ... que/pcr_counter.htm
上分别输入你的上下游引物,计算退火温度。
2.如果温度相同,就在这个温度下扩增;如果不同,就从中间的温度开始向两边的温度扩增,总有一个温度是最好的。
3楼2008-11-11 21:34:47
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aiduo8587

银虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★
louyiceng(金币+5,VIP+0):支持新虫参加讨论
一般是60℃,单也有差别,要根据种类确定,但一般相差不大。
4楼2008-11-12 13:06:15
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proteinwang

铜虫 (正式写手)

在pCR仪上58-65度之间设置上几个梯度,进行一次PCR扩增,然后根据扩增目的条带的情况以及目的条带的含量(即简单通过凝胶成像的亮度判定)即可确定你引物的最佳退火温度。
引物的退火温度有一般的推断,但是还得需要自己的实验验证。
5楼2008-11-14 10:01:37
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longfeng

金虫 (小有名气)


司马诸葛(金币+1,VIP+0): 8-11 19:15
最好是在58度左右扩增,且尽可能要高
6楼2008-11-14 10:33:21
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