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绿松石6727

新虫 (小有名气)

重要的是摩尔比,2k不算大片段

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11楼2016-07-21 17:21:54
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531536142

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1楼: Originally posted by 朱庆平 at 2016-07-16 18:18:40
最近在做连接实验:用PCR片段(约2kb)连接T载体和表达载体pET-30b,总是连接不上,操作都还规范,也都确定了DNA片段加了A,有酶切位点,连了3、4次了,都连接不上,不知道是什么原因?T载体和加A试剂盒用的都是宝生 ...

请问DNA加A,你用的是dATP,还是dNTP?

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12楼2016-12-27 01:14:45
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531536142

新虫 (初入文坛)

我克隆了3kb的启动子,一直都连不上

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13楼2016-12-27 01:15:13
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531536142

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 小冀- at 2016-07-20 18:36:31
片段其实不太大~三四千的连着也没什么问题,你试着把片段多加点,我们那时候直接用1:10体系,而且我感觉有的时候真的很靠运气

你好,我现在用Teasy连一个3k的启动子,都弄了一个月,每次都长点,就是菌p没有,请问哪里出现了问题?

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14楼2016-12-27 01:20:34
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小冀-

版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by 531536142 at 2016-12-27 01:20:34
你好,我现在用Teasy连一个3k的启动子,都弄了一个月,每次都长点,就是菌p没有,请问哪里出现了问题?
...

你的启动子好大呀~菌落pcr的时候不要挑多了,否则p不出来,Teasy是什么链接呀,和T载体原理一样吗?如果是的话可能是载体自连造成的假阳性
···
15楼2016-12-27 08:39:53
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