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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大片段连接载体的有效方法
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绿松石6727

新虫 (小有名气)
重要的是摩尔比，2k不算大片段

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11楼2016-07-21 17:21:54
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531536142

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by 朱庆平 at 2016-07-16 18:18:40
最近在做连接实验：用PCR片段（约2kb）连接T载体和表达载体pET-30b，总是连接不上，操作都还规范，也都确定了DNA片段加了A，有酶切位点，连了3、4次了，都连接不上，不知道是什么原因？T载体和加A试剂盒用的都是宝生 ...

请问DNA加A，你用的是dATP,还是dNTP？

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12楼2016-12-27 01:14:45
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531536142

新虫 (初入文坛)
我克隆了3kb的启动子，一直都连不上

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13楼2016-12-27 01:15:13
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531536142

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小冀- at 2016-07-20 18:36:31
片段其实不太大~三四千的连着也没什么问题，你试着把片段多加点，我们那时候直接用1：10体系，而且我感觉有的时候真的很靠运气

你好，我现在用Teasy连一个3k的启动子，都弄了一个月，每次都长点，就是菌p没有，请问哪里出现了问题？

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14楼2016-12-27 01:20:34
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by 531536142 at 2016-12-27 01:20:34
你好，我现在用Teasy连一个3k的启动子，都弄了一个月，每次都长点，就是菌p没有，请问哪里出现了问题？
...

你的启动子好大呀~菌落pcr的时候不要挑多了，否则p不出来，Teasy是什么链接呀，和T载体原理一样吗？如果是的话可能是载体自连造成的假阳性
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···
15楼2016-12-27 08:39:53
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