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juansheng198

新虫 (初入文坛)

[求助] 为何我的银染像枣糕? 已有3人参与

新人刚进实验室不久,正在学习蛋白纯化,其中需要做银染。请师兄师姐们帮忙分析一下这是出了什么问题啊?为何像枣糕一样……
枣糕那个是第一次做的,感觉是和胶发生了反应啊,不知道该怎么改进。
今天又做了第二次,与之前相同的方法,结果如图二。

我的试验方案大致是:
FIX:
methanol 50ml;
冰醋酸 10ml;
fixative enhancer concentrate 10ml;
ddH2O补足到100ml。

摇20分钟 倒掉FIX,用100ml水洗10分钟,洗两次。

再用50mlSTAIN洗:
ddH2O 17.5ml;
Silver complex 2.5ml;
moderator 2.5ml;
Development: 2.5ml;
DAS 25ml

protocol上说染20分钟就可以了,但是直到一个小时左右才显色……

加STOP(5%冰醋酸)

用200ml水洗5分钟。

请帮帮我分析一下哪里可以改进?谢谢!

为何我的银染像枣糕?
1.JPG


为何我的银染像枣糕?-1
2.jpg
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我做过银染page胶,跟这个不一样
想做个有趣的人,却在逗比的道路上越走越远~
2楼2016-07-15 15:07:20
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jiafeijiafei

金虫 (小有名气)

我是用的sigma的兼容质谱的银染试剂盒做的

发自小木虫Android客户端
3楼2016-07-19 09:32:12
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一笑中

铜虫 (正式写手)

4楼2016-07-19 09:55:08
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juansheng198

新虫 (初入文坛)

换了新的染色剂就正常了。。
5楼2016-07-30 01:21:50
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star013

新虫 (知名作家)


我们可以帮您做技术服务

发自小木虫Android客户端
6楼2016-08-02 11:43:57
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xiaohaizi0220

木虫 (正式写手)

基础研发之沉默

【答案】应助回帖

银染非常灵敏,背景这么脏,建议把电泳的缓冲液,胶缓冲液,染色液都换了,注意水的质量。
有限的我却思考无限的存在
7楼2016-08-03 11:26:24
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

看起来蛮有食欲的~~~~

银染这个方法很灵敏  即便是买的试剂盒  也不能完全按照说明书的步骤去做  关于洗的时间什么的也要自己优化一下  既然第二次那个做出来了  我觉得染色液以及洗的时间你应该优化一下看看  另外配好的溶液尽量避光放置
8楼2016-08-03 11:33:46
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