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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 为何我的银染像枣糕？
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juansheng198

新虫 (初入文坛)

[求助] 为何我的银染像枣糕？ 已有3人参与

新人刚进实验室不久，正在学习蛋白纯化，其中需要做银染。请师兄师姐们帮忙分析一下这是出了什么问题啊？为何像枣糕一样……
枣糕那个是第一次做的，感觉是和胶发生了反应啊，不知道该怎么改进。
今天又做了第二次，与之前相同的方法，结果如图二。

我的试验方案大致是：
FIX：
methanol 50ml；
冰醋酸 10ml；
fixative enhancer concentrate 10ml；
ddH2O补足到100ml。

摇20分钟 倒掉FIX，用100ml水洗10分钟，洗两次。

再用50mlSTAIN洗：
ddH2O 17.5ml;
Silver complex 2.5ml;
moderator 2.5ml;
Development: 2.5ml；
DAS 25ml

protocol上说染20分钟就可以了，但是直到一个小时左右才显色……

加STOP（5%冰醋酸）

用200ml水洗5分钟。

请帮帮我分析一下哪里可以改进？谢谢！

为何我的银染像枣糕？
1.JPG


为何我的银染像枣糕？-1
2.jpg
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1楼 2016-07-15 11:59:34
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我做过银染page胶，跟这个不一样
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想做个有趣的人，却在逗比的道路上越走越远~
2楼2016-07-15 15:07:20
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jiafeijiafei

金虫 (小有名气)
我是用的sigma的兼容质谱的银染试剂盒做的

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3楼2016-07-19 09:32:12
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一笑中

铜虫 (正式写手)
想吃

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4楼2016-07-19 09:55:08
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juansheng198

新虫 (初入文坛)
换了新的染色剂就正常了。。
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5楼2016-07-30 01:21:50
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star013

新虫 (知名作家)
我们可以帮您做技术服务

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6楼2016-08-02 11:43:57
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xiaohaizi0220

木虫 (正式写手)

基础研发之沉默

【答案】应助回帖

银染非常灵敏，背景这么脏，建议把电泳的缓冲液，胶缓冲液，染色液都换了，注意水的质量。
赞一下(2人) 回复此楼
有限的我却思考无限的存在
7楼2016-08-03 11:26:24
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

看起来蛮有食欲的~~~~

银染这个方法很灵敏  即便是买的试剂盒  也不能完全按照说明书的步骤去做  关于洗的时间什么的也要自己优化一下  既然第二次那个做出来了  我觉得染色液以及洗的时间你应该优化一下看看  另外配好的溶液尽量避光放置
赞一下(2人) 回复此楼
8楼2016-08-03 11:33:46
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