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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 数字PCR技术交流
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wjf7862203

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 朱庆平 at 2016-07-16 10:49:01
不太了解，不过20μL的反应体系分散到那么多的微孔里，是要干什么？这么多细小的反应体系是用来检测什么的？其实就是，数字PCR用来作甚的？

分成更多的微反应就是来进行绝对定量 所以数字PCR对上样量有一定的要求，如果目标拷贝数太高，那所有的微反应都是阳性，就没有定量的意义，所以一般是对痕量的目标基因进行检测，如果目标基因很高，需要进行稀释后上样。荧光PCR检测结果是35个循环往后的，可以直接用数字PCR进行绝对定量

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11楼2016-07-18 05:50:27
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原子伴侣

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
raindance bio-rad都属于油包水型，形成一定数量、稳定的油包水微滴是关键。
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12楼2018-01-08 14:19:57
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小小风的爱

铁虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
渊博震天: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-07-28 16:45:46
引用回帖:
3楼: Originally posted by 朱庆平 at 2016-07-16 10:49:01
不太了解，不过20μL的反应体系分散到那么多的微孔里，是要干什么？这么多细小的反应体系是用来检测什么的？其实就是，数字PCR用来作甚的？

是这样的，伯乐的仪器，采用油包水，将20微升的体系分成20000个液滴，但是反应的话还是将这20微升吸到一个管子里，进行PCR扩增（这里面的油滴可以耐受高温，就是一个小的PCR体系），扩增完成后，在进行荧光测定，荧光测定对每一个油滴都会检测，最后来绝对定量。
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13楼2018-07-27 17:04:59
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风随心动

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送红花一朵
您好，可以向您请教个问题吗？请问您知道数字PCR做出来的微滴荧光比较离散是什么原因吗？
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偶见繁星梦九天，只愿沧海桑田始如先。
14楼2019-10-30 10:47:39
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