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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » PCR验证正确，酶切没有目的片段
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hnnydx

木虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by sayen at 2016-07-15 21:18:35
pcr鉴定需要一个载体上的引物一个插入片段的引物，否则会有假阳性

我一般用扩增目的基因的一对引物验证，有问题吗？如果载体上没有通用引物，怎么验证

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11楼2016-07-15 21:23:20
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sayen

银虫 (小有名气)
★
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全用目的基因的引物会有假阳性，虽然几率不会太高，但还是有的。根据载体序列随便设计和载体引物就行

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12楼2016-07-15 21:33:14
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hnnydx

木虫 (著名写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by sayen at 2016-07-15 21:33:14
全用目的基因的引物会有假阳性，虽然几率不会太高，但还是有的。根据载体序列随便设计和载体引物就行

扩增目的片段的一对引物，载体上的引物一对引物，怎样组合进行PCR验证

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13楼2016-07-15 21:44:01
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sayen

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
上游用载体引物，下游用片段引物，反之亦可

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14楼2016-07-15 23:11:39
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故国的海岸

铜虫 (小有名气)
引物污染

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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15楼2016-07-16 01:04:48
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妞—潇洒

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
假阳性结果 酶切不对基本就没戏了

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我只管面朝大海，龇牙咧嘴，至于花爱开不开
16楼2016-07-16 13:02:12
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y383514131

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
酶是不是失效了，加大template浓度
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此事说来终觉浅，莫问出处便是真
17楼2016-07-16 21:50:17
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爱心无敌
18楼2016-07-16 22:17:51
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匿名

用户注销 (著名写手)
本帖仅楼主可见
19楼2016-07-25 22:43:07
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阿尔卑斯英

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以进行分步酶切试试，或者选取其它酶检测，测序是检测构建质粒成功的最终方法。
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20楼2016-07-26 16:01:11
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