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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 蛋白纯化
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刘淘淘52010

新虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白纯化

糖苷水解酶纯化，用DEAE-52进行纯化，kcl洗脱梯度60.90.120.150.180，用的缓冲液是0.02M  Ph等于5HAc-NaAc，90梯度能洗出目的蛋白，但是做电泳有很多杂带。问一问是这个蛋白是不是不适合用离子交换柱来纯化？

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1楼 2016-07-06 12:07:44
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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
刘淘淘52010(youlinglyw代发): 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩 2016-07-06 15:56:32
有杂带正常，蛋白纯化不可能一步到位的，即使是特异性吸附也会出现杂带。
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一品黄山
2楼2016-07-06 12:45:24
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hc-material

专家顾问 (职业作家)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
youlinglyw: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩 2016-07-06 15:56:56
描述的问题很正常啊。一步层析纯化达不到理想的状态很正常。既然用DE52能吸附目的蛋白，就适合啊。然后优化层析过程，试试其他PH的缓冲液。优化层析条件后纯度还不够，就在加一步其他的纯化啊，层析或者其他的，离子啊，疏水都可以尝试。祝顺利
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3楼2016-07-06 14:01:32
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