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西大慢慢

铁虫 (著名写手)

[交流] PCR扩增

最近做PCR总是扩增不出来产物，我的片段大小243，上下游引物primer5设计退火温度分别为58、57.1度，实测喂56、62度，扩增设计退火温度56度，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离回收捣碎，加40微升灭菌水4度过夜，再进行扩增。前两次都有条带，后面就没有了，结果像这样了，是怎么回事？大家帮帮我吧！

PCR扩增


PCR扩增-1


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1楼 2016-07-05 22:16:55
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西大慢慢

铁虫 (著名写手)
还有这张以后回收没有做出来的
PCR扩增-2



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2楼2016-07-05 22:18:51
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chenguestc

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
回收捣碎是什么意思？
很大的可能是模板DNA严重降解或污染
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3楼2016-07-06 14:24:23
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我爱chi辣椒

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
后面应该是模板浓度太高，减少模板试试。

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A right way maybe not a good way！
4楼2016-07-07 09:09:07
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阿尔卑斯英

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
再进行扩增一次，如果仍出现这种现象，肯定是PCR产物污染所示，建议对实验室做实验常出现这种现象的，做PCR实验室应该使用防污染体系的UNG PCR MIX.
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5楼2016-07-07 11:06:22
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