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西大慢慢

铁虫 (著名写手)

[交流] PCR扩增

最近做PCR总是扩增不出来产物,我的片段大小243,上下游引物primer5设计退火温度分别为58、57.1度,实测喂56、62度,扩增设计退火温度56度,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离回收捣碎,加40微升灭菌水4度过夜,再进行扩增。前两次都有条带,后面就没有了,结果像这样了,是怎么回事?大家帮帮我吧!

PCR扩增


PCR扩增-1


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西大慢慢

铁虫 (著名写手)

还有这张以后回收没有做出来的
PCR扩增-2



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2楼2016-07-05 22:18:51
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chenguestc

木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
回收捣碎是什么意思?
很大的可能是模板DNA严重降解或污染
3楼2016-07-06 14:24:23
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我爱chi辣椒

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
后面应该是模板浓度太高,减少模板试试。

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A right way maybe not a good way!
4楼2016-07-07 09:09:07
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阿尔卑斯英

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
再进行扩增一次,如果仍出现这种现象,肯定是PCR产物污染所示,建议对实验室做实验常出现这种现象的,做PCR实验室应该使用防污染体系的UNG PCR MIX.
5楼2016-07-07 11:06:22
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