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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR结果发现碱基突变，表达出来的蛋白会没有功能吗？
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] PCR结果发现碱基突变，表达出来的蛋白会没有功能吗？ 已有5人参与

如题

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1楼 2016-07-05 21:56:56
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tango01

新虫 (初入文坛)
★
xn8008: 金币+1, 鼓励发帖交流 2016-07-06 06:00:52
恭喜你得到了一个mutant,你先查一下突变之后的密码子有没有变，如果是同义突变，那最多只会影响表达，蛋白的氨基酸序列还是和野生型一样。但如果氨基酸发生变换，那可能一个突变会导致蛋白功能上的显著差异。
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2楼2016-07-05 22:21:04
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看你的突变位点是在内含子区还是外显子区。
如果是内含子，蛋白没差别。
如果是在外显子区，根据密码子简并性，蛋白有两种可能，1，蛋白无差别，2，蛋白有差别。
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14楼2016-07-07 13:11:02
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普通回帖

yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tango01 at 2016-07-05 22:21:04
恭喜你得到了一个mutant,你先查一下突变之后的密码子有没有变，如果是同义突变，那最多只会影响表达，蛋白的氨基酸序列还是和野生型一样。但如果氨基酸发生变换，那可能一个突变会导致蛋白功能上的显著差异。

那怎么办呢？

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3楼2016-07-05 22:22:38
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yuguiyan at 2016-07-05 22:22:38
那怎么办呢？
...

比啊

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4楼2016-07-06 00:05:31
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-06 07:41:43
如果不是移码突变，突变位置不在关键催化位点，就不会有大问题。如果发生移码突变，肯定不表达了，如果是关键催化位点突变，绝大部分情况是酶活降低甚至为0。
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5楼2016-07-06 00:20:53
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sayen

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 鼓励发帖交流 2016-07-06 06:01:06
氨基酸突变一两个看突变在什么位置，突变在功能区会影响蛋白功能，突变在非功能区影响就不大。但是如何确定蛋白的每个分区功能和结构是很难的，对于氨基酸突变我的意见有两点：1.把pcr扩增出来的片段送测序，看是否该位点都有突变还是部分突变，如果都突变说明你用来钓基因的cDNA来源里这个基因本身在该位点就是这样，是自然状态下存在的一种蛋白序列，既然是自然存在的，必然有功能活性，不用担心，即使和NCBI比对有出入也没关系。2.将小鼠，人的该基因序列进行比对，会发现大部分序列一致，而从物种进化角度考虑，重要的功能区通常保守不易变，所以小鼠和人比对一致的序列估计含有功能区，而不一致的部分可能就是衔接的区域，看你突变的位点是属于什么位置，如果在两者比对一致的序列出现突变，那就只能重新钓了，否则可以不用太担心。

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6楼2016-07-06 00:27:19
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sayen

银虫 (小有名气)
以上是个人观点，认为这样做出错的概率最小，当然最好的是能扩出完全正确的序列

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7楼2016-07-06 00:30:07
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木之虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我以前也出现这种情况，一种情况是taq酶的问题造成的，你可以尝试用高保真酶扩增试试，看看突变还存在吗；另外一种是你的确碰到了mutant，也就是SNP位点，翻译成蛋白看看，氨基酸的序列是否发生了突变，如果是无义突变的话，是不会影响蛋白质活性的
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执子之手，与子偕老。
8楼2016-07-06 13:39:58
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 木之虫 at 2016-07-06 13:39:58
我以前也出现这种情况，一种情况是taq酶的问题造成的，你可以尝试用高保真酶扩增试试，看看突变还存在吗；另外一种是你的确碰到了mutant，也就是SNP位点，翻译成蛋白看看，氨基酸的序列是否发生了突变，如果是无义突 ...

啥是无义突变

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9楼2016-07-06 13:42:58
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木之虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by yuguiyan at 2016-07-06 13:42:58
啥是无义突变
...

就是突变本身不会引起氨基酸序列的变化，简单的说有的氨基酸的密码子有很多个
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执子之手，与子偕老。
10楼2016-07-06 13:45:42
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