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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助，为什么我的DNA电泳一直失败
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memorize1991

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-07 07:34:03
xn8008: 应助指数+1 2016-07-07 08:46:28
引物二聚体比较严重，你是多大体系的？引物可能放多了，或者你设计的引物不太好。你可以先用CTAB法提下DNA，～～我做实验对DNA要求比较高，我用的试剂盒提的，目标片段长度在200～300bp之间。退火温度和你一样，PCR最后设定4摄氏度，hold。跑出来蛮好的～

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11楼2016-07-05 19:07:21
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 洛一7轮 at 2016-07-05 18:48:51
具体能改善吗
...

不知道你是什么材料？可以换用其他的方法提取DNA，制胶时使用新配的TAE或TBE电泳缓冲液，加热时要多沸腾几次，保证琼脂糖充分溶解。电泳时也使用新配的电泳缓冲液。
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12楼2016-07-05 19:19:53
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洛一7轮

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by memorize1991 at 2016-07-05 19:07:21
引物二聚体比较严重，你是多大体系的？引物可能放多了，或者你设计的引物不太好。你可以先用CTAB法提下DNA，～～我做实验对DNA要求比较高，我用的试剂盒提的，目标片段长度在200～300bp之间。退火温度和你一样，PCR ...

体系是25ul,模板是2ul,我查过文献也有用2微升的

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13楼2016-07-05 21:06:58
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洛一7轮

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by stone2239 at 2016-07-05 19:19:53
不知道你是什么材料？可以换用其他的方法提取DNA，制胶时使用新配的TAE或TBE电泳缓冲液，加热时要多沸腾几次，保证琼脂糖充分溶解。电泳时也使用新配的电泳缓冲液。...

是新配的，有沸腾几次

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14楼2016-07-05 21:07:44
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洛一7轮

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by stone2239 at 2016-07-05 19:19:53
不知道你是什么材料？可以换用其他的方法提取DNA，制胶时使用新配的TAE或TBE电泳缓冲液，加热时要多沸腾几次，保证琼脂糖充分溶解。电泳时也使用新配的电泳缓冲液。...

提取扩增细菌dna某个片段

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15楼2016-07-05 21:08:25
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picker

金虫 (初入文坛)
可能是胶的问题～

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哈哈哈
16楼2016-07-06 12:42:36
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18716248350

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的maker也没有跑好，可能胶有点问题，200-500bp用2%的琼脂糖，配15毫升的胶用微波炉低火打2分钟左右至液体澄清透明，水煮沸提模板没有问题，我也是这么做的，你煮沸的时候用封口胶封住盖口，25ul体系加1ul就够了，另外可以做一个梯度PCR看看退火温度是不是不准确。祝实验顺利
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17楼2016-07-06 19:31:23
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烨火赤心

铜虫 (小有名气)
你的胶可能凝的时间有点短

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18楼2016-07-06 21:53:15
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xz2001199802

金虫 (正式写手)
阳性对照呢

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越学越无知
19楼2016-07-09 09:45:46
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瘦瘦的阳光

新虫 (初入文坛)
退火温度降个5度再试试？不然估计DNA有问题，一定要用水煮吗？我们用的是CTAB法

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20楼2016-07-09 12:23:51
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