应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助，为什么我的DNA电泳一直失败
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
232/3返回列表上一页123下一页
查看: 3497  |  回复: 22
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

memorize1991

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-07 07:34:03
xn8008: 应助指数+1 2016-07-07 08:46:28
引物二聚体比较严重，你是多大体系的？引物可能放多了，或者你设计的引物不太好。你可以先用CTAB法提下DNA，～～我做实验对DNA要求比较高，我用的试剂盒提的，目标片段长度在200～300bp之间。退火温度和你一样，PCR最后设定4摄氏度，hold。跑出来蛮好的～

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2016-07-05 19:07:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 洛一7轮 at 2016-07-05 18:48:51
具体能改善吗
...

不知道你是什么材料？可以换用其他的方法提取DNA，制胶时使用新配的TAE或TBE电泳缓冲液，加热时要多沸腾几次，保证琼脂糖充分溶解。电泳时也使用新配的电泳缓冲液。
赞一下 回复此楼
12楼2016-07-05 19:19:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

洛一7轮

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by memorize1991 at 2016-07-05 19:07:21
引物二聚体比较严重，你是多大体系的？引物可能放多了，或者你设计的引物不太好。你可以先用CTAB法提下DNA，～～我做实验对DNA要求比较高，我用的试剂盒提的，目标片段长度在200～300bp之间。退火温度和你一样，PCR ...

体系是25ul,模板是2ul,我查过文献也有用2微升的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
13楼2016-07-05 21:06:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

洛一7轮

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by stone2239 at 2016-07-05 19:19:53
不知道你是什么材料？可以换用其他的方法提取DNA，制胶时使用新配的TAE或TBE电泳缓冲液，加热时要多沸腾几次，保证琼脂糖充分溶解。电泳时也使用新配的电泳缓冲液。...

是新配的，有沸腾几次

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
14楼2016-07-05 21:07:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

洛一7轮

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by stone2239 at 2016-07-05 19:19:53
不知道你是什么材料？可以换用其他的方法提取DNA，制胶时使用新配的TAE或TBE电泳缓冲液，加热时要多沸腾几次，保证琼脂糖充分溶解。电泳时也使用新配的电泳缓冲液。...

提取扩增细菌dna某个片段

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
15楼2016-07-05 21:08:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

picker

金虫 (初入文坛)
可能是胶的问题～

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
哈哈哈
16楼2016-07-06 12:42:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18716248350

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的maker也没有跑好，可能胶有点问题，200-500bp用2%的琼脂糖，配15毫升的胶用微波炉低火打2分钟左右至液体澄清透明，水煮沸提模板没有问题，我也是这么做的，你煮沸的时候用封口胶封住盖口，25ul体系加1ul就够了，另外可以做一个梯度PCR看看退火温度是不是不准确。祝实验顺利
赞一下(1人) 回复此楼
17楼2016-07-06 19:31:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

烨火赤心

铜虫 (小有名气)
你的胶可能凝的时间有点短

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
18楼2016-07-06 21:53:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xz2001199802

金虫 (正式写手)
阳性对照呢

发自小木虫Android客户端
回复此楼
越学越无知
19楼2016-07-09 09:45:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

瘦瘦的阳光

新虫 (初入文坛)
退火温度降个5度再试试？不然估计DNA有问题，一定要用水煮吗？我们用的是CTAB法

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
20楼2016-07-09 12:23:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 洛一7轮 的主题更新
232/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿深大085601材料工程专业（专硕）300分可以调剂去哪 +3 10160315 2026-04-02 3/150 2026-04-02 20:40 by ms629
[考研] 求调剂22408 288分 +4 new382 2026-04-02 4/200 2026-04-02 16:07 by 氮气气气
[考研] 321求调剂 一志愿 浙江工业大学生物医药 +5 嘿嘿HC 2026-04-01 6/300 2026-04-02 15:23 by sophie2180
[考研] 一志愿北京科技大学材料学硕328分求调剂 +6 1段时间 2026-03-31 7/350 2026-04-02 13:57 by 3041
[考研] 262求调剂 +5 励志一定发文章 2026-04-02 6/300 2026-04-02 12:51 by yulian1987
[考研] 311求调剂 +14 蓝月亮亮 2026-03-30 14/700 2026-04-02 12:18 by 1753564080
[考研] 0710生物学336分求调剂 +3 kiyy 2026-04-01 3/150 2026-04-02 10:54 by w虫虫123
[考研] 085600，材料与化工321分，求调剂 +13 大馋小子 2026-03-27 13/650 2026-04-02 10:48 by sanrepian
[考研] 生物学308分求调剂（一志愿华东师大） +5 相信必会光芒万� 2026-03-31 6/300 2026-04-02 10:16 by guoweigw
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-03-31 11/550 2026-04-01 22:25 by zhouyuwinner
[考研] 298求调剂 +4 什么是胖头鱼 2026-03-30 6/300 2026-04-01 22:06 by 客尔美德
[考研] 273求调剂 +19 李芷新1 2026-03-31 19/950 2026-04-01 21:49 by chyhaha
[考研] 求调剂0703 +5 周嘉尧 2026-03-31 8/400 2026-04-01 20:32 by ltltkkk
[考研] 一志愿 南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕 +7 @taotao 2026-03-30 7/350 2026-04-01 14:30 by chenqifeng666
[考研] 求收留 +8 1943443204 2026-03-28 8/400 2026-03-31 15:00 by -迷了路啊路
[考研] 英一数一总分334求调剂 +4 陈阳坤 2026-03-31 4/200 2026-03-31 14:22 by 记事本2026
[考研] 085404 22408 315分 +5 zhuangyan123 2026-03-31 6/300 2026-03-31 13:48 by limeifeng
[考研] 083000环境科学与工程调剂，总分281 +4 橙子（胜意） 2026-03-30 4/200 2026-03-31 00:44 by Linzejun
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +8 邱gl 2026-03-27 8/400 2026-03-28 12:42 by 唐沐儿
[考研] 292求调剂 +4 求求了收下我吧� 2026-03-26 4/200 2026-03-27 10:37 by zhshch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭