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memorize1991

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-07-07 07:34:03
xn8008: 应助指数+1 2016-07-07 08:46:28
引物二聚体比较严重,你是多大体系的?引物可能放多了,或者你设计的引物不太好。你可以先用CTAB法提下DNA,~~我做实验对DNA要求比较高,我用的试剂盒提的,目标片段长度在200~300bp之间。退火温度和你一样,PCR最后设定4摄氏度,hold。跑出来蛮好的~

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11楼2016-07-05 19:07:21
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 洛一7轮 at 2016-07-05 18:48:51
具体能改善吗
...

不知道你是什么材料?可以换用其他的方法提取DNA,制胶时使用新配的TAE或TBE电泳缓冲液,加热时要多沸腾几次,保证琼脂糖充分溶解。电泳时也使用新配的电泳缓冲液。
12楼2016-07-05 19:19:53
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洛一7轮

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by memorize1991 at 2016-07-05 19:07:21
引物二聚体比较严重,你是多大体系的?引物可能放多了,或者你设计的引物不太好。你可以先用CTAB法提下DNA,~~我做实验对DNA要求比较高,我用的试剂盒提的,目标片段长度在200~300bp之间。退火温度和你一样,PCR ...

体系是25ul,模板是2ul,我查过文献也有用2微升的

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13楼2016-07-05 21:06:58
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洛一7轮

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by stone2239 at 2016-07-05 19:19:53
不知道你是什么材料?可以换用其他的方法提取DNA,制胶时使用新配的TAE或TBE电泳缓冲液,加热时要多沸腾几次,保证琼脂糖充分溶解。电泳时也使用新配的电泳缓冲液。...

是新配的,有沸腾几次

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14楼2016-07-05 21:07:44
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洛一7轮

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by stone2239 at 2016-07-05 19:19:53
不知道你是什么材料?可以换用其他的方法提取DNA,制胶时使用新配的TAE或TBE电泳缓冲液,加热时要多沸腾几次,保证琼脂糖充分溶解。电泳时也使用新配的电泳缓冲液。...

提取扩增细菌dna某个片段

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15楼2016-07-05 21:08:25
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picker

金虫 (初入文坛)

哈哈哈
16楼2016-07-06 12:42:36
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18716248350

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的maker也没有跑好,可能胶有点问题,200-500bp用2%的琼脂糖,配15毫升的胶用微波炉低火打2分钟左右至液体澄清透明,水煮沸提模板没有问题,我也是这么做的,你煮沸的时候用封口胶封住盖口,25ul体系加1ul就够了,另外可以做一个梯度PCR看看退火温度是不是不准确。祝实验顺利
17楼2016-07-06 19:31:23
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烨火赤心

铜虫 (小有名气)

你的胶可能凝的时间有点短

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18楼2016-07-06 21:53:15
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xz2001199802

金虫 (正式写手)

越学越无知
19楼2016-07-09 09:45:46
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瘦瘦的阳光

新虫 (初入文坛)

退火温度降个5度再试试?不然估计DNA有问题,一定要用水煮吗?我们用的是CTAB法

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20楼2016-07-09 12:23:51
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