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alarm827

新虫 (初入文坛)

[交流] 苯基柱HPLC梯度基线 已有4人参与

流动相A:乙腈。
流动相B:0.1%磷酸水溶液。
梯度和图谱如下图。
理论上乙腈比例越高,基线越高,是不会出现20分钟左右的那个梯度峰。换了几台岛津LC20都是这样。求教是什么原因?

苯基柱HPLC梯度基线


苯基柱HPLC梯度基线-1


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-lizi

新虫 (正式写手)


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梯度更换,柱子里冲出杂质来了吧

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2楼2016-07-04 10:38:58
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alarm827

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by -lizi at 2016-07-04 10:38:58
梯度更换,柱子里冲出杂质来了吧

新色谱柱也是这样。

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3楼2016-07-04 11:23:57
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-lizi

新虫 (正式写手)


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引用回帖:
3楼: Originally posted by alarm827 at 2016-07-04 11:23:57
新色谱柱也是这样。
...

如果新柱子也这样,拆下柱子接二通,用异丙醇冲洗检测器20分钟,再甲醇冲洗干净

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4楼2016-07-04 11:44:12
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alarm827

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by -lizi at 2016-07-04 11:44:12
如果新柱子也这样,拆下柱子接二通,用异丙醇冲洗检测器20分钟,再甲醇冲洗干净
...

5针空白完全重叠,如果污染的话应该大小不一,平时中控用了3台机器都是一样。
另外20分钟的梯度峰与38分钟梯度峰的吸收一致。
我觉得按照理论的话,20至30分钟(80%乙腈)的基线应该维持在20000uV,为什么基线会突然降到负值?
苯基柱HPLC梯度基线-2


苯基柱HPLC梯度基线-3


苯基柱HPLC梯度基线-4



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5楼2016-07-04 13:20:58
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天使的爱戴

木虫 (小有名气)


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38分钟那个梯度峰是可以理解的,因为你突然将水相的含量提升的原因,但是20分钟的梯度峰没办法解释,如果你用相同的流动相换不同机器都是一样的图形的话,可以建议重新更新乙腈批号和水溶液的批号在试一下,看看还是不是这个样子。
20分钟的梯度峰更像是水或者乙腈相互影响出来的结果
6楼2016-07-04 16:29:12
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alarm827

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 天使的爱戴 at 2016-07-04 16:29:12
38分钟那个梯度峰是可以理解的,因为你突然将水相的含量提升的原因,但是20分钟的梯度峰没办法解释,如果你用相同的流动相换不同机器都是一样的图形的话,可以建议重新更新乙腈批号和水溶液的批号在试一下,看看还是 ...

好的,我试试更换乙腈和水。再试试把梯度变缓,看看是不是容剂效应造成的。
另外用C18柱,没有出现这种情况。

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7楼2016-07-04 21:03:19
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ruan5058

铜虫 (正式写手)


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换个品牌的柱子呢?会不会是固定相流失导致的基流上升??

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8楼2016-07-06 06:05:45
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alarm827

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by ruan5058 at 2016-07-06 06:05:45
换个品牌的柱子呢?会不会是固定相流失导致的基流上升??

也有人说乙腈没有加磷酸的关系,有空时我都试试。

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9楼2016-07-06 19:58:17
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w9412

新虫 (正式写手)


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溶剂峰。我在做一个样品,也是出线一个意外峰,突然下降。

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液相,分析纯化,多肽蛋白
10楼2016-07-06 20:25:50
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