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稻香田虫

新虫 (初入文坛)

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[求助] TG酶活力的测定方法？已有1人参与

TG酶活力的测定方法？买的TG（谷氨酰胺转氨酶）酶都是微生物谷氨酰胺转氨酶（MTG）吗？

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1楼 2016-07-01 19:14:41

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roger524

铜虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
稻香田虫: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 很专业 2017-03-09 17:59:46

首先，TG没的检测：
氨酰胺转氨酶活性检测方法
1 原理
这个实验是用来检测从Streptoverticillium mobaraense 的发酵液中用乙醇提取所得酶的酶活力。谷氨酰胺转氨酶的活性，可通过测定CBZ-Gln-Gly 与羟胺反应生成氧肟酸的量来计算。
2 待测酶液的制备
2.1 将适量的样品溶解于大约45ml 0.2M 的Tris-HCl 缓冲液(pH6.0)中，室温搅拌30min 混合均匀；
2.2 将上述溶液用0.2M 的Tris-HCl 缓冲液(pH6.0)定容至50ml；
3 检测方法 3.1 样品管
3.1.1 取0.2ml 待测溶液于试管中，37±1℃恒温水浴预热1min；
3.1.2 加入2ml 底物溶液（37±1℃恒温水浴预热10min），并立即混匀； 3.1.3 37±1℃条件下准确反应10min； 3.1.4 加入2ml 显色溶液终止反应；
3.1.5 反应终止后，将反应混合液3,000rpm 离心10min； 3.1.6 取上清，以水作对照，于525nm 波长处测定其吸收值，为待测酶液吸收值。
3.2 空白管
3.2.1 将0.2ml 反应溶液和2ml 显色溶液混合均匀，在37±1℃恒温条件放置 10min；
3.2.2 加入2ml 底物溶液，并混匀，混合液于3,000rpm 离心10min；

第二：TG酶有几种来源，看你，买的是那种TG酶，有动物提取的，也有微生物发酵出来的