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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » ripa能用来裂解大肠杆菌吗？
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liuwukang

新虫 (小有名气)

[求助] ripa能用来裂解大肠杆菌吗？

实验室的超声破碎仪有点问题，不好用，假如先用溶菌酶处理菌体再用ripa裂解，这个方法可行吗？提出来的样品能直接用于电泳吗？假如这样提取蛋白，包涵体的蛋白是溶解了还是没溶解呢？

@gyesang @hc-material 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2016-06-30 23:01:32
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hc-material

专家顾问 (职业作家)
理论上溶菌酶处理可以裂解菌，释放胞内物，可以直接电泳，但包涵体鼓励溶解不了！

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2楼2016-06-30 23:04:34
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liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2016-06-30 23:04:34
理论上溶菌酶处理可以裂解菌，释放胞内物，可以直接电泳，但包涵体鼓励溶解不了！

那我先用溶菌酶处理释放胞内蛋白，然后包涵体按照正常方法尿素处理可以不？
另外，溶菌酶处理有的是37度温浴有的冰浴，应该用哪种方法好呢？另外，溶菌酶处理之后直接就破碎了吗？不需要冻融或者别的处理吗？

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3楼2016-06-30 23:30:47
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hc-material

专家顾问 (职业作家)
溶菌酶37度处理，不需冻融，然后包涵体加变性剂溶解

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4楼2016-07-01 00:01:05
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liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hc-material at 2016-07-01 00:01:05
溶菌酶37度处理，不需冻融，然后包涵体加变性剂溶解

溶菌酶37度温浴半小时够吗？还有就是我找的裂解液配方还含有triton，会有影响吗？还是不加triton比较好？

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5楼2016-07-01 00:07:44
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木蠹

铜虫 (初入文坛)
triton是活化剂，辅助解聚包涵体和聚合蛋白的，没有问题

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6楼2016-07-05 17:54:26
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Clara眉

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2016-06-30 23:04:34
理论上溶菌酶处理可以裂解菌，释放胞内物，可以直接电泳，但包涵体鼓励溶解不了！

溶菌酶能裂解革兰氏阴性菌吗

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7楼2019-05-10 22:07:25
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峰子大牛

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Clara眉 at 2019-05-10 22:07:25
溶菌酶能裂解革兰氏阴性菌吗
...

我最近做这个但是一直没有裂解   不知道你怎么解决的呢

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8楼2019-06-03 23:25:16
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