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安静旅游吧

新虫 (正式写手)

[交流] 液相条件优化、Pro A柱子测蛋白浓度

Pro A柱子测蛋白浓度,平衡液0.2 M PB,pH6.75,洗脱液0.2 M PB,pH3.0。目前时间是6.5 min。想缩短分析时间,故尝试加大流速和提高柱温箱温度以提前峰保留时间,如下图。1 mL/min流速,不管25度、30度、35度,保留时间都差不多。流速提高至1.5 mL/min时,保留时间明显提前,但是峰面积明显减小!下一步怎么办?
可否提高洗脱液盐浓度?

液相条件优化、Pro A柱子测蛋白浓度
图片1.png
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yangli_sisi

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 安静旅游吧 at 2016-06-30 12:53:52
降低洗脱液的pH不知道是否可以

不可能,虽然我没做过蛋白,但感觉应该是洗脱液的pH应该是你蛋白的等电点,此时蛋白的状态和别的pH时的不一样,所以能够洗下来。所以你换pH不一定能洗出来。所以改流速更靠谱一些。
6楼2016-06-30 16:23:56
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yangli_sisi

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
流速提高峰面积肯定会变小,但你峰形挺好应该也能用。如果你想要峰面积不改变只提前的,那就试试改变流动相比率
3楼2016-06-30 08:49:50
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安静旅游吧

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yangli_sisi at 2016-06-30 08:49:50
流速提高峰面积肯定会变小,但你峰形挺好应该也能用。如果你想要峰面积不改变只提前的,那就试试改变流动相比率

流动相有平衡液和洗脱液,没走梯度,都是等度,100%

发自小木虫IOS客户端
4楼2016-06-30 12:38:07
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安静旅游吧

新虫 (正式写手)

降低洗脱液的pH不知道是否可以

发自小木虫IOS客户端
5楼2016-06-30 12:53:52
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