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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » RNA中的DNA污染
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shmimy

铜虫 (小有名气)

[交流] RNA中的DNA污染

我提的RNA中老是有DNA污染
怎么办啊
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1楼 2008-11-07 16:39:52
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
用的是Trizol提的吗？加了氯仿之后要剧烈震荡。移上清的时候记得不要碰到有机相，宁可少取一点也不要碰到就对了~~

如果是自己配试剂，酚要用水饱和酚哦，不然肯定会有DNA污染，移上清还是同个道理

还有就是注意器具要洁净
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2楼2008-11-07 16:50:07
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shmimy

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2008-11-7 16:50:
用的是Trizol提的吗？加了氯仿之后要剧烈震荡。移上清的时候记得不要碰到有机相，宁可少取一点也不要碰到就对了~~

如果是自己配试剂，酚要用水饱和酚哦，不然肯定会有DNA污染，移上清还是同个道理

还有就是 ...

是不是要用涡旋仪震荡啊
我只是用手上下震荡了
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3楼2008-11-07 16:51:52
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
手震荡就行了
其实主要是混匀，混得非常匀就行
DNA会留在有机相，所以千万不要吸到红色的部分
宁可少吸也不要贪心，污染了不是更可惜？
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4楼2008-11-07 17:07:09
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shmimy

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2008-11-7 17:07:
手震荡就行了
其实主要是混匀，混得非常匀就行
DNA会留在有机相，所以千万不要吸到红色的部分
宁可少吸也不要贪心，污染了不是更可惜？

嗯
知道了
我再提一次试试吧
谢谢
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5楼2008-11-07 17:20:20
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★
shmimy(金币+5,VIP+0):谢谢
觊觎金币ing

其实理解了原理就知道如何避免了
水饱和酚呈酸性，这个条件下，只有RNA会留在水相，而DNA会在有机相
Trizol里头就含有水饱和酚啦~

但是提DNA用的是Tris饱和酚，呈碱性，这时DNA和RNA都会在水相
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6楼2008-11-07 20:12:24
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veronica5129

铜虫 (初入文坛)
一般很难保证提取的的RNA中没有genomic DNA contamination,建议提取RNA用DNase1消化，条件37° 25 min,然后85° 10min.
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性格决定命运
7楼2008-11-10 17:37:26
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litao852

我认为：不能吸到红色的部分！宁可少吸！可以用DNA酶去除试试！
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8楼2008-11-10 17:40:30
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翱天

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2008-11-7 17:07:
手震荡就行了
其实主要是混匀，混得非常匀就行
DNA会留在有机相，所以千万不要吸到红色的部分
宁可少吸也不要贪心，污染了不是更可惜？

支持
我觉得也要尽量少加、不加DNAse，要是觉得少了可以跑次PCR-电泳回收。宁缺“勿烂”……
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路过。。。
9楼2008-11-11 14:33:29
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bio-engine

银虫 (小有名气)
实在不行就买点DNA酶来处理一下。
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10楼2008-11-15 17:08:07
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