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师姐独家收藏的细胞培养小技巧 已有3人参与
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1. 不管是买的细胞，还是别人惠赠的细胞，刚拿到手赶紧的做两件事：检测是否有支原体污染；迅速扩增冻存，冻存细胞复苏后第二天最好更换一次培养基。 2. 发现细胞有污染迅速处理掉，特别是当你养了很多种细胞时。细菌污染、真菌污染很容易发现，支原体污染的话，细胞会长的慢，可以买个支原体检测的试剂盒定期检测一下。 3. 不同细胞生长周期不同。有的生长很快，比如说 MDA-MB-231，传代的时候取离心悬液的十分之一就已经足够了。有的又是特别慢，比如 BT474，传代是一分二，复苏起始的时候两周多才能长满。这就需要要在培养细胞的过程中多多摸索。 4. 对于娇弱的细胞，就得细心呵护。胰酶消化不能过久，吹得时候要轻柔，离心时候也要注意转速和时间。每天都要去看一下细胞，肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。记住，是每天。 操作方面 1. 最好不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套。自己的东西自己包自己烘干。枪头什么的只要有可能污染就换。 2. 严格无菌操作。操作台一定要摆个酒精灯，所有操作紧密围绕在酒精灯周围进行。离开过操作台的东西再进操作台之前一定要用酒精消毒一遍，稍微烤一下，别直接放到火上，离一段距离。包括一切实验耗材、仪器、以及你带着手套的手。 3. 水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，记得要勤换。身体的各个部分尽量的少接触不需要接触的地方的地方。比如实验台，又比如培养箱内部。培养箱隔一段时间彻底用酒精棉擦洗一次。 4. 细胞房日常的值日清洁是必须的，此外还要定期熏蒸。晚上离开的时候最好给细胞房照紫外，超净台是用完就开。最好的是同一时间就你一个人在细胞房养细胞。 5. 动作要既轻柔又有力。动作太重会有一堆一堆的气泡，动作太轻就吹不下来。刚开始的时候吹细胞太痛苦了，稍微一下就起泡。后来就是吹的时候枪里的培养基不要一次全都压出来，留一点，枪的最头部尽量深的在液面以下。 |
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2楼2016-09-12 16:41:05
longqi_2007 
新虫 (初入文坛)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 52.8
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- 虫号: 1005412
- 注册: 2010-04-25
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
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很多实验人员是没有太重视细胞的支原体污染情况，这个是需要定期检测的，有些重要的实验甚至每一次传代都会测一次。 目前支原体检测试剂盒有很多种方法，荧光的，化学发光的，PCR的，一般PCR方法最灵敏。我们是用的炎熙生物的touchdown PCR检测试剂盒，比一般PCR要灵敏，一般在早期就可以检测出来，可以用相应的支原体清除剂来保护细胞。效果很好。可以在网站上查询到具体的信息。 http://www.biothrive.cn/Product/415769/ |
3楼2017-05-16 20:54:34
4楼2017-05-17 09:32:49
