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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 碳水化合物 » 凝胶层析填料的选择！
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lee101520

新虫 (正式写手)

[求助] 凝胶层析填料的选择！ 已有3人参与

请问各位大侠：
                      现在做多糖的分离纯化，之前使用过DEAE-52，由于样品没有什么极性，直接就都出来了，但和残余的蛋白分开了，然后使用Sephadex G-200和 Sepharose CL-4B效果都不好，几个比较大的组分出现连续的峰，目前考虑使用Q Sepharose FF、DEAE-Sepharose FF和CM--Sepharose FF，不知是否合适？这几个填料貌似都挺贵的，不敢随便买来试试！还请有经验的大侠不吝赐教！
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1楼 2016-06-16 14:12:48
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w911227

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lee101520: 金币+1, ★有帮助 2016-06-21 00:04:31
你多糖的分子量大概是什么范围啊？Sephadex G-200的分离范围是5000-600000Da，太大了，也许你的多糖分子量没有很大，所以用Sephadex G-200分不开，建议换Sephadex G-100或者Sephadex G-75试试。
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苦难的日子终将逝去，但强者却永存
2楼2016-06-16 21:36:07
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lee101520

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by w911227 at 2016-06-16 21:36:07
你多糖的分子量大概是什么范围啊？Sephadex G-200的分离范围是5000-600000Da，太大了，也许你的多糖分子量没有很大，所以用Sephadex G-200分不开，建议换Sephadex G-100或者Sephadex G-75试试。

分子量在一百万左右，太大了，比较愁人！
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3楼2016-06-17 09:01:07
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zinfly

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lee101520: 金币+2, ★有帮助 2016-06-21 00:04:11
还是得根据分子量等性质来分，所以你参考一下这几个的说明书
感觉都不靠谱啊，离子交换柱，你确定合适么？》
http://wenku.baidu.com/link?url= ... 463w4M3-ZEfHbtfbmKW

http://wenku.baidu.com/link?url= ... jokVspJOyI7NAQiyxPW
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4楼2016-06-18 17:43:17
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lichao_ch

新虫 (正式写手)
主要是有两个分子量组分比较接近，第一个峰刚下来马上就出现第二个峰了，分子筛分有点费劲！
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5楼2016-06-18 23:14:58
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
lee101520: 金币+4, ★★★很有帮助 2016-06-21 00:04:03
就用离子交换法吧，凝胶过滤分辨率很差的，只适合分子量相差2倍以上的体系的分离。先Q和SP分别试下，离子的没有多贵。若贵的就用亲和的，比如刀豆蛋白的，硼酸的亲和柱，亲和的很贵。祝顺利
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6楼2016-06-20 11:47:52
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lee101520

新虫 (正式写手)
好的，先试试，有问题再请教！ @hc-material
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7楼2016-06-21 00:03:46
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小蓝小蓝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lee101520 at 2016-06-21 00:03:46
好的，先试试，有问题再请教！ hc-material

用离子交换可以分出来吗？为啥DEAE分不出来，离子交换可以分出来？

发自小木虫Android客户端
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8楼2016-09-01 22:54:47
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伊吹七月

新虫 (初入文坛)
您好，我想请问一下您使用CL-4B柱的时候使用恒流泵了吗？我买了凝胶，发现耐压太小，可是常压下缓冲液流速只有0.1ml/min，太浪费时间了，请问你是怎么做的呢？
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9楼2018-09-10 14:54:10
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