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师姐独家收藏的 DNA 提取小技巧 已有1人参与
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DNA 提取还真是说起来容易、做起来难。 首先大家得明确一点，DNA 是遗传信息的载体，获得高分子量、高纯度的 DNA 是你开展后续测序、杂交等实验的前提。所以，注意了，要高分子量、高纯度哦。我相信肯定有很多人一开始提取的时候，DNA 的浓度是不合格的。 要想做好，其实是有一些技巧的，接下去师姐要开始放大招了。 1. 我有一个习惯，当实验遇到问题的时候，喜欢把实验原理和流程研读几遍，每个环节逐一分析。真正的实验高手不仅仅是会按实验流程操作，他还懂得每一步的原理，这就是格物致知——知其然更知其所以然。 2. 样品和试剂的检查。样品是否反复冻融？样品采集是否合格？试剂是否是现配？这些需要确定，尤其是临床上的样品，可能并非你亲自采集，更要确认其合格。实验中所有的试剂和耗材均要避免核酸酶污染，防止 DNA 降解。 3. 样品量增加是否可以增加 DNA 浓度？资料显示，样品量过多会影响细胞裂解，继而导致 DNA 含量的降低。那么怎么样的量比较合适呢？一个是咨询你的师姐，一个是自己摸索，可以做一个样品量对应的 DNA 浓度曲线。 4. 动作要轻柔。高温水浴时要注意定时且轻柔，千万别指弹 PCR 管，会引起 DNA 机械断裂。使用移液器吹打及其他操作也要轻柔，避免带来伤害，DNA 真的很脆弱。 5. DNA 沉淀是否充分。一般沉淀用的是异丙醇或 70%乙醇，基本原理就是 DNA 不溶于他们。一个是要控制他们的量和延长沉淀时间，还有一点就是可以将异丙醇或 70%乙醇预冷，因为 DNA 不溶于异丙醇和乙醇，尤其在低温条件下。 6. DNA 洗涤要小心。倾倒上清、留取沉淀的步骤中一定要缓慢小心进行。  708F.tmp.jpg |
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2楼2016-07-02 08:00:23