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lanlan1119金虫 (小有名气)
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[交流]
大家好，求教关于流动相的问题
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| 请问，每次换流动相时，要用流动相平衡柱子多长时间。我用甲醇：0.01%的磷酸配比，每次走柱子前平衡大约一小时，但是加入的水的比例加大，发现柱头的压力升的好高啊，纯甲醇一样流速走压力就是0。而且每次加水平衡柱半小时左右就发现有一个大的吸收继续平衡基线会慢慢变平，这是正常现象吗？ |
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bullace
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佳怡(金币+2,VIP+0):谢谢布姐姐^_^来参加我们的活动吧~
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我用的是反相hplc，流动相极性增大，分离效果是越来越好，但峰的吸收值却变得越来越小，纯甲醇的时候最大吸收是0.15个au，到80：20的时候是0.06个au.50:50是0.02au,峰的个数没有明显增多都是四个峰，只是分得越来越开---------------------------------------------正常，非常正常 本来就是这样的，为了分离度而不得已调整出峰时间的话，，出峰时间越靠后，峰形就会越“趴”，越靠前就越“尖锐”，峰面积变化不大。如果调整流速的话，峰面积也会跟着变的。所以要定量的话，一定要保证标样和样品是同一个分离条件。 每次换流动相之前都要先用甲醇：水=10：90冲洗然后再用纯甲醇冲柱，然后再用新流动相平衡柱子进样吗？----------------------其实这样做的目的就是把柱子里的东西最大限度的冲洗出来 [ Last edited by bullace on 2008-11-6 at 16:03 ] |
9楼2008-11-06 15:59:50
2楼2008-11-05 20:38:14
lanlan1119
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有点晕了！ 压力为0怎么有问题呢，我用的是3.9x15mm的柱子，流速0.1~0.6压力都显示的是0，1.0的时候会有120~140的压力，柱子能承受的最大压力是4000.流动相用甲醇：0.01%磷酸水=50：50，流速0.6一开始显示的压力是0，走柱子半小时后压力就升到500左右了，走柱子一小时后就稳定在650左右。要是流速升到1压力能达到1300多。 用甲醇：磷酸水0.6ml/min走基线的时候发现其间有峰出现，走长时间基线平衡柱子峰能慢慢降下来基线回复平稳，但这个过程中伴随着压力的升高（由0升至650），有没有可能是水中有强保留的物质太多导致柱子有点堵造成压力升高的。 因为在用甲醇：磷酸水=50：50、70：30、80：20.等度走半小时样，用甲醇洗柱时都会有吸光度很大的吸收峰的峰出现，随着这些峰慢慢被洗脱出后，压力就慢慢降下来了。 |
3楼2008-11-05 21:58:22
youarebeloved
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4楼2008-11-06 10:10:53