应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 融合基因插入到载体里如何判断正反向
202/2返回列表上一页12
查看: 5385  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

didibisheng

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by stone2239 at 2016-06-13 00:34:53
用载体的通用引物测序，根据测序结果不就能直接判断出插入方向了吗。

就是用的通用引物测序的，得到的测序结果与预期不符， 不知道怎么解决
赞一下 回复此楼
11楼2016-06-13 20:09:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

didibisheng

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-06-12 21:32:44
一般都是用载体的正向、反向引物吧？

这个好像是判断正向插入吧，我需要反向插入
赞一下 回复此楼
12楼2016-06-13 20:09:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

didibisheng

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhao强 at 2016-06-12 17:24:11
可以找老师问一下

老师让做三次酶切鉴定，分别判断是否插入以及插入方向，就是觉得这样做太麻烦了，想通过菌P然后就送测呢~
赞一下 回复此楼
13楼2016-06-13 20:11:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 不错的建议 2016-06-15 10:25:59
举个例子，我使用酵母载体表达基因，载体已有启动子，和终止子，我的基因要正向插入才可以形成有功能的蛋白，我一般在基因上设计正向引物，在载体上的终止子上设计反向引物，去做PCR如果正向插入肯定可以扩增出条带，如果基因是反向插入，那做PCR是得不到条带的，因为两条引物的方向一致了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
14楼2016-06-14 14:19:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

didibisheng

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by gastrodia at 2016-06-14 14:19:58
举个例子，我使用酵母载体表达基因，载体已有启动子，和终止子，我的基因要正向插入才可以形成有功能的蛋白，我一般在基因上设计正向引物，在载体上的终止子上设计反向引物，去做PCR如果正向插入肯定可以扩增出条带 ...

谢谢啦
回复此楼
15楼2016-06-14 15:02:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by didibisheng at 2016-06-13 20:09:18
就是用的通用引物测序的，得到的测序结果与预期不符， 不知道怎么解决...

不符就说明你选的克隆不对，重新选。
赞一下 回复此楼
16楼2016-06-14 19:30:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

didibisheng

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by stone2239 at 2016-06-14 19:30:22
不符就说明你选的克隆不对，重新选。...

恩，谢谢
回复此楼
17楼2016-06-15 08:48:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
10楼: Originally posted by didibisheng at 2016-06-13 20:07:13
怎么设计引物啊，我是需要这段融合序列反向插入到载体里~...

引物设计你可以问我
赞一下 回复此楼
奋斗是我们前进的动力！
18楼2016-06-15 10:21:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

werq63

金虫 (著名写手)
PCr经常不尽人意还是测序直观，或者酶切，但是我一直在怀疑这种情况会不会正反向都有呢？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
19楼2016-06-15 22:13:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

载体通用引物测一下序就知道了吧
赞一下 回复此楼
20楼2016-06-16 04:26:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 didibisheng 的主题更新
202/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ANUsWpSnuWQD 2026-08-06 3/150 2026-08-07 02:06 by nSM3ys5fefM3
[基金申请] 听说今天filecode变了 +19 布布和一二 2026-08-06 33/1650 2026-08-07 01:25 by 云上清扬
[基金申请] 基金中了 +6 laoda193707 2026-08-06 6/300 2026-08-06 23:34 by dragonxp
[基金申请] filecode +10 等待解的谜 2026-08-06 14/700 2026-08-06 21:16 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +3 archvillain 2026-08-06 7/350 2026-08-06 21:05 by archvillain
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 6/300 2026-08-06 20:19 by 苏知砚
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 12/600 2026-08-06 15:11 by eddyin
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[教师之家] 咨询面上基金 +4 李长云 2026-07-31 7/350 2026-08-06 11:20 by 李长云
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +22 低垂的野花 2026-07-31 30/1500 2026-08-05 18:03 by 低垂的野花
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[论文投稿] 十年后又回来了，论文投稿求助 +3 哈哈114477 2026-08-01 3/150 2026-08-04 15:40 by tegsgjy20
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 娱乐 +4 Tide man 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:51 by wgch518
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭