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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 融合基因插入到载体里如何判断正反向
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didibisheng

新虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by stone2239 at 2016-06-13 00:34:53
用载体的通用引物测序，根据测序结果不就能直接判断出插入方向了吗。

就是用的通用引物测序的，得到的测序结果与预期不符， 不知道怎么解决
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11楼2016-06-13 20:09:18
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didibisheng

新虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-06-12 21:32:44
一般都是用载体的正向、反向引物吧？

这个好像是判断正向插入吧，我需要反向插入
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12楼2016-06-13 20:09:54
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didibisheng

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by zhao强 at 2016-06-12 17:24:11
可以找老师问一下

老师让做三次酶切鉴定，分别判断是否插入以及插入方向，就是觉得这样做太麻烦了，想通过菌P然后就送测呢~
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13楼2016-06-13 20:11:26
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gastrodia

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 不错的建议 2016-06-15 10:25:59
举个例子，我使用酵母载体表达基因，载体已有启动子，和终止子，我的基因要正向插入才可以形成有功能的蛋白，我一般在基因上设计正向引物，在载体上的终止子上设计反向引物，去做PCR如果正向插入肯定可以扩增出条带，如果基因是反向插入，那做PCR是得不到条带的，因为两条引物的方向一致了

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14楼2016-06-14 14:19:58
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didibisheng

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by gastrodia at 2016-06-14 14:19:58
举个例子，我使用酵母载体表达基因，载体已有启动子，和终止子，我的基因要正向插入才可以形成有功能的蛋白，我一般在基因上设计正向引物，在载体上的终止子上设计反向引物，去做PCR如果正向插入肯定可以扩增出条带 ...

谢谢啦
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15楼2016-06-14 15:02:35
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by didibisheng at 2016-06-13 20:09:18
就是用的通用引物测序的，得到的测序结果与预期不符， 不知道怎么解决...

不符就说明你选的克隆不对，重新选。
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16楼2016-06-14 19:30:22
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didibisheng

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by stone2239 at 2016-06-14 19:30:22
不符就说明你选的克隆不对，重新选。...

恩，谢谢
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17楼2016-06-15 08:48:34
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xn8008

至尊木虫 (知名作家)

Balance Angel

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
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10楼: Originally posted by didibisheng at 2016-06-13 20:07:13
怎么设计引物啊，我是需要这段融合序列反向插入到载体里~...

引物设计你可以问我
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奋斗是我们前进的动力！
18楼2016-06-15 10:21:17
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werq63

金虫 (著名写手)
PCr经常不尽人意还是测序直观，或者酶切，但是我一直在怀疑这种情况会不会正反向都有呢？

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19楼2016-06-15 22:13:59
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

载体通用引物测一下序就知道了吧
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20楼2016-06-16 04:26:30
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