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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR好几个条带，测序问题
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
10楼: Originally posted by fengjunchen at 2016-06-14 14:59:28
一般是可以备注上切胶回收的，很多测序公司都可以帮忙切胶，省事儿。
不过既然是多个条带，那么还是建议自己胶回，不然人家回收的东西总归不放心。

回收了，测序公司说浓度太低不能测序，哭晕

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11楼2016-06-14 15:25:26
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fengjunchen

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by yuguiyan at 2016-06-14 15:25:26
回收了，测序公司说浓度太低不能测序，哭晕
...

这个也是可能的……测序程序和PCR程序是不一样的，PCR是妥妥的指数扩增，焦磷酸测序时随着PCR的进行，一部分扩增会停止。所以，测序反应对于模板的纯度和浓度是有一定的要求的。
考虑杂带问题和你那个15ng/ul的回收浓度，我猜你的条带算不上亮，那么可以尝试将回收产物再次PCR，这样由于模板的单一，除非引物问题，否则是不应该有杂带的，而且条带也应该很亮才对。这样再送测序，虽然两轮PCR可能导致未知来源的错配，但是起码能确定片段是不是你要的基因。
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12楼2016-06-14 16:30:14
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