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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助 蛋白表达
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sunbinice

银虫 (初入文坛)

[交流] 求助 蛋白表达

我的蛋白表达不出来：我的目的片段正确插入载体pMAL-c2x中，目的片段大概是2000bp，但是诱导后怎么弄都表达不出来，我已经试了很多的条件，有谁也做这个的麻烦请给我建议，非常感谢。
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1楼 2008-11-04 19:16:59
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zhongdianshi

银虫 (小有名气)
空载体对照，有44KD的诱导带吗？
引用回帖:
Originally posted by sunbinice at 2008-11-4 19:16:
我的蛋白表达不出来：我的目的片段正确插入载体pMAL-c2x中，目的片段大概是2000bp，但是诱导后怎么弄都表达不出来，我已经试了很多的条件，有谁也做这个的麻烦请给我建议，非常感谢。

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7楼2008-12-18 01:44:31
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~~
1.确认编码框正确
2.确认载体是可以诱导表达的
3.确认是表达宿主
4.分析载体的启动子等等…………
5.换载体……
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金币是赌出来的
3楼2008-11-05 10:19:13
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zhangxingliang

★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~~
换表达细胞吧  要是原核表达 BL21 不出现目标蛋白条带 就用 Rosseta 试试吧？
前提是克隆一定要正确  酶切和 PCR鉴定还不确定的情况下  测序吧
赞一下(10人) 回复此楼
4楼2008-11-05 16:55:27
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sunbinice

银虫 (初入文坛)
谢谢提供的建议
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5楼2008-12-17 19:54:23
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