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xmczhby

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[交流] 小鼠表皮细胞与真皮细胞的原代获取

准备：无菌手术器械，75%乙醇，0.25%胰酶，0.2% dispase酶，0.2% 胶原酶，胎鼠或初生小鼠

步骤：
1、将小鼠浸于75%乙醇中消毒5min；
2、转移至超净工作台中，背部朝上固定四肢；
3、用剪刀剪下背部皮肤（注意：不要剪到皮下肌肉组织）；
4、刮除皮下多余组织（注意：不要刮得太厉害）；
5、将皮肤剪成宽约3mm的条状，表皮朝上平铺于平皿中；
6、加入0.2%的dispase（加入的量以使皮肤漂浮起为宜）；
7、将上述皮肤组织于37℃中处理1.5-2h，或置于4℃冰箱中过夜；
9、用镊子轻轻分离表皮和真皮，然后再用PBS缓冲液分别冲洗表皮和真皮2-3次，剪碎；
10、表皮细胞获取：剪碎的表皮组织用0.25%的胰酶37℃消化15-20min；用移液枪吹打消化组织若干次，吸出漂浮的表皮，1000rpm离心5min；吸出上清，加入K-SFM培养基，吹打混匀，计数，调整细胞浓度后接种。
11、真皮细胞获取：剪碎的真皮组织用0.2%的胶原酶37℃消化30min，；用移液枪吹打消化组织若干次，200目筛过滤除去多余组织，1000rpm离心5min收集真皮细胞，吸出上清，加入含20%新生牛血清的DMEM培养基，吹打混匀，计数，调整细胞浓度后接种。

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1楼 2016-06-06 11:12:43

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