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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 同样的培养条件，为什么菌的生长速度出现了很大的差异？
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ashelychan

木虫 (小有名气)

[交流] 同样的培养条件，为什么菌的生长速度出现了很大的差异？

大侠们，请帮忙，我的实验碰到了问题，这个坎过不去，接下去的实验就做不了。本人明年6月份就该研究生毕业了，现在非常着急，十万分之火急。
       我有一株菌A，培养条件为无机盐基础培养基+0.25%葡萄糖、30℃、180 r/min，以前一直这么培养，每次培养到12h左右时菌体的OD600仅为0.2-0.3左右，而且葡萄糖能够被完全利用完，葡萄糖利用完后所测的pH值在6.0左右。重复了2年同样的手段，菌株的生长情况一直是这样没有发生太大变化。但是从今年4月份开始之后，发现菌体的生长情况发生了很大的改变。现在采用相同的手段，菌株培养6h时OD600就疯长到0.8，而且葡萄糖没办法被全部利用完，这个时候测的pH值则远低于原来的6。原本怀疑是染杂菌了，但是镜检没有发现任何异常。我的这株菌具有降解某种农药的能力，对它的这种降解能力进行检验，也是正常的。急死我了，这两个月找了无数次原因，都没能解决。将菌种库保存的原始菌株活化出来进行培养，出现相同的疯长现象。我这株菌率属于恶臭假单胞菌，所以取了菌种库里的模式菌KT2440进行培养，发现KT2440也出现这种疯长现象（以前对KT2440进行培养没有出现过这种疯长现象）。将里面的各种培养基成分都换成新的、原来公司出产的，还是出现一样的问题。把温度和转速更加严格的调整，保证其变化幅度不大且跟原来的一样，还是不能解决这一问题。将里面的葡萄糖换成不同公司和原来公司的，除了一次未开封的原来公司的试剂出现最初的正常情况，其他公司的和原来公司但已经开封用过的葡萄糖还是出现这种疯长的不正常情况。请问，这是怎么回事？我该怎么办？是葡萄糖里掺杂了其他杂质，还是其他什么原因？有没有人碰到这种情况？大侠们都是怎么解决的？跪求解决之道。
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1楼 2016-06-05 23:16:36
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g1107780254

新虫 (初入文坛)
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7楼: Originally posted by g1107780254 at 2016-06-06 11:44:58
首先：ph比原来低，od比原来高，说明确实比原来长的好。按照你说法不是原料问题，不是菌种问题，不是工艺问题。但从结果看，培养基成份肯定发生变化了。我的建议是看看你的灭菌锅是不是发生问题了？糖对温度比较敏感 ...

检查一下灭菌时候的温度和压力是不是对应的。例如121℃对应的压力0.105mpa

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8楼2016-06-06 11:50:42
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Victophe

铜虫 (小有名气)
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有没有进行菌落平板计数，如果一切正常，涨多了，不好吗？

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2楼2016-06-05 23:53:31
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ashelychan

木虫 (小有名气)
没有进行菌落平板计数。这里，长多了不好，这样就没法重复出原来的结果，而且接下来要做的实验与它的生长速度密切相关，必须是原来的速度才行。

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3楼2016-06-06 00:08:52
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liminwu2008

金虫 (初入文坛)
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是你活化后的培养基出了问题

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4楼2016-06-06 00:46:44
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ashelychan

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ashelychan at 2016-06-06 00:08:52
没有进行菌落平板计数。这里，长多了不好，这样就没法重复出原来的结果，而且接下来要做的实验与它的生长速度密切相关，必须是原来的速度才行。

活化后用的培养基配方跟原来还是一样的。原来认为培养基成分出问题，所以就将每种试剂都换成新的，但是还是出现这个问题。

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5楼2016-06-06 09:08:54
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ashelychan

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Victophe at 2016-06-05 23:53:31
有没有进行菌落平板计数，如果一切正常，涨多了，不好吗？

没有进行菌落平板计数。这里，长多了不好，这样就没法重复出原来的结果，而且接下来要做的实验与它的生长速度密切相关，必须是原来的速度才行。

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6楼2016-06-06 09:09:21
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g1107780254

新虫 (初入文坛)
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首先：ph比原来低，od比原来高，说明确实比原来长的好。按照你说法不是原料问题，不是菌种问题，不是工艺问题。但从结果看，培养基成份肯定发生变化了。我的建议是看看你的灭菌锅是不是发生问题了？糖对温度比较敏感。

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7楼2016-06-06 11:44:58
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Victophe

铜虫 (小有名气)
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引用回帖:
8楼: Originally posted by g1107780254 at 2016-06-06 11:50:42
检查一下灭菌时候的温度和压力是不是对应的。例如121℃对应的压力0.105mpa
...

如果不对应的话，楼主应该早有发现…应该不是这方面的原因…

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9楼2016-06-06 23:01:36
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clark2010

金虫 (小有名气)
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你的初始接种量是多少（保证相似的OD值和相同的接种量）？你配置的培养基初始pH是多少，前后是否一致？
对了，测一下配培养基用的水的pH。以前我做实验的时候遇到过，净水器坏了，水的pH值异常，培养基也没法用。
祝你好运！
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10楼2016-06-07 04:42:50
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