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求助！小鼠脑组织石蜡切片染色脱片、烂片已有2人参与
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protocol如下： 灌注取脑后，4%多聚甲醛4℃固定24-48h。修块3-4mm。 脱水（常温）：45%、55%、65%、75%、85%、95%、100%酒精各30min； 透明（常温）：（100%酒精+二甲苯）/2 10min，二甲苯①20min，二甲苯②至完全透明（约20min） 浸蜡（60℃）：（二甲苯+石蜡①）/2 10min，石蜡①30min，石蜡②40min；石蜡①为低熔点，石蜡②为高熔点 包埋：浸蜡后用石蜡②手动包埋； 切片厚度：6um、（8um也切的有） 展片：40℃水中展片； 烤片：60摄氏度烤片机侧烤约5min后吸去水分，转移至60℃温箱烤约4h； 脱蜡：烤片后趁蜡未凝固，进行脱蜡。二甲苯 5min×2，100%酒精 3min，95%酒精 2min， 85%酒精 2min，75%酒精 2min，流水冲洗 2min（放在缸子里用水泡的，换了几次水）； 染色： HE染色：苏木精 5-8min（新配为5min，时间长可为8min，用前过滤），流水冲洗 3min 1%盐酸酒精分化 5s，流水冲洗 1min，0.1%伊红 1-2min， 脱水：85%酒精 2min，95%酒精 2min，100%酒精 2min， 100%无水乙醇：二甲苯（1:1） 2min 透明：二甲苯（I） 3min，二甲苯（II） 3min ； CV染色：浸入CV染液中 10-20min， 脱水： 75%乙醇 2min， 85%乙醇 2min，95%乙醇 2min，100%无水乙醇 2min， 100%无水乙醇：二甲苯（1:1） 2min 透明： 二甲苯（I） 3min， 二甲苯（II） 3min； 封片：中性树胶封片（整个染色过程避免干片）。 部分HE染色、CV染色片子结果如图（附件）所示，基本上没有完整的片子（染色时，片子随着在液体里的时间脱片、烂片的程度加深），另CV染色着色浅。 请教论坛大神是什么原因？哪里出了问题，该怎么解决？  IMG_20160531_220018.jpg  IMG_20160531_220022.jpg  IMG_20160531_220057.jpg  IMG_20160531_220106.jpg |
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7楼2016-06-01 22:48:44
zhangalading
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- 专业: 细胞生理学
2楼2016-06-01 00:29:46
3楼2016-06-01 08:54:53
zhangalading
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我们是每个组织放到包埋盒里，然后过70-75-80-85-90-95-100x2～1：1各半小时，透明10min（皮肤，实验室其它组织5min），透明成什么样子没拿出来看过，透明太久了组织太脆了，不好切，切的太厚了，染色后拍片清晰度不好调，自己也是菜鸟一枚，慎～ 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-06-01 16:34:42